導語：如何才能寫好一篇微生物研究方法，這就需要搜集整理更多的資料和文獻，歡迎閱讀由公務員之家整理的十篇范文，供你借鑒。

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關(guān)鍵詞：土壤微生物生態(tài)學；核酸探針雜交；梯度凝膠電泳；PCR

土壤中存在著極其豐富的微生物種類，它們在土壤生態(tài)系統(tǒng)中各自行使著獨特的功能。自1953年以來，分子生物學理論和技術(shù)取得了驚人的成就，許多分子生物學研究方法和理念被應用到微生物生態(tài)學研究中，為微生物生態(tài)學研究領(lǐng)域注入了新的活力，極大地推動了微生物分子生態(tài)學的發(fā)展。下面介紹近年主要的幾種研究方法：

一、標記核酸探針雜交技術(shù)

1.基本原理

以核酸分子雜交技術(shù)為核心，利用探針分析DNA序列及片段長度多態(tài)性。探針是能與特定核苷酸序列發(fā)生特異性互補的已知核酸片段，它可以是長探針（100～l000bp），可以是短核苷酸片段（10～50bp），也可以是從RNA制備DNA探針，斑點印跡和狹線印跡雜交等不同的方法。

2.應用

科學家應用核酸雜交方法研究了被燃油污染及不污染的土壤提取的細菌DNA，結(jié)果表明：被污染的土壤提取的細菌DNA中各種烴的降解基因的檢出率顯著高于不污染的樣品，且定量分析結(jié)果表明污染越嚴重，這種降解基因的含量越高，因而可以用該方法作為對土壤中燃油污染程度的評價。

3.原位熒光雜交技術(shù)

（1）基本原理。FISH是以熒光標記取代同位素標記的一種新的原位雜交方法。它檢測核苷酸序列是利用熒光標記的探針在細胞內(nèi)與特異的互補核苷酸序列雜交，通過激發(fā)雜交探針的熒光來檢測信號。

（2）應用及其優(yōu)缺點?？梢赃M行樣品的原位雜交，應用于環(huán)境定微生物種群鑒定、種群數(shù)量分析及其特異微生物跟蹤檢測，現(xiàn)已成為微生物分子生態(tài)學研究中的熱點技術(shù)，在土壤微生物分子生態(tài)學領(lǐng)域應用廣泛。FISH技術(shù)的應用受到環(huán)境樣品微生物的生理狀態(tài)的影響，芽孢、放線菌及休眠時期的細胞的細胞膜的通透性低，影響群落中部分種屬豐度的錯誤估計。

二、基于PCR技術(shù)的研究方法

PCR是一種聚合酶鏈式反應技術(shù)，主要特點是短時間內(nèi)在實驗室條件下人為地控制并特異擴增目的基因或DN段，使研究的目的基因及其環(huán)境樣品中的微量微生物基因得到無限的擴增，為這些基因和微量微生物種群的研究提供了保證。

1.PCR-RFLP方法

（1）原理。PCR-RFLP法是將PCR引物中的一條加以熒光標記，其基本原理是用PCR擴增目的DNA，擴增產(chǎn)物再用特異性內(nèi)切酶消化切割成不同大小片段，直接在凝膠電泳上分辨。

（2）應用?，F(xiàn)在很多研究人員利用16SrRNA來研究土壤微生物的多樣性。該技術(shù)還可以用來監(jiān)測因環(huán)境改變而引起的微生物種群的變化。

2.PCR-SSCP方法

（1）原理。日本Orita等研究發(fā)現(xiàn)，單鏈DN段呈復雜的空間折疊構(gòu)象，這種立體結(jié)構(gòu)主要是由其內(nèi)部堿基配對等分子內(nèi)相互作用力來維持的。當有一個堿基發(fā)生改變時，會或多或少地影響其空間構(gòu)象，使構(gòu)象發(fā)生改變?？臻g構(gòu)象有差異的單鏈DNA分子在聚丙烯酰胺凝膠中受排阻大小不同。因此，通過非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳，可以非常敏銳地將構(gòu)象上有差異的分子分離開。

（2）應用。Sabine Peters等人用該法研究群落的演替和菌種的多樣性，并同傳統(tǒng)的培養(yǎng)方法比較指出PCR-SSCP方法避免了傳統(tǒng)培養(yǎng)的費時費力以及誤差大的干擾，適合對微生物群落結(jié)構(gòu)和演替的分析。

三、DNA擴增片段梯度電泳檢測技術(shù)

1.變性梯度凝膠電泳

（1）基本原理。雙鏈DNA分子在一般的聚丙烯酰胺凝膠電泳時，其遷移行為決定于其分子大小和電荷。DGGE技術(shù)在一般的聚丙烯酰胺凝膠基礎(chǔ)上，加入了變性劑（尿素和甲酰胺）梯度，從而能夠把同樣長度但序列不同的DN段區(qū)分開來。

（2）應用。DGGE方法是應用最早也是最常用的單堿基突變篩查方法之一，自從1993年DGGE被引入微生物學以來，該技術(shù)被廣泛地用作分子工具比較微生物群落的多樣性以及監(jiān)視種群動態(tài)。PCR-DGGE用于分析華盛頓州東部4種土壤細菌群落結(jié)構(gòu)和多樣性，結(jié)果表明：管理和農(nóng)學實踐對細菌群落結(jié)構(gòu)的影響比年降水量更大。

2.溫度梯度凝膠電泳

（1）基本原理。溫度梯度凝膠電泳技術(shù)則是利用溫度梯度變性的原理，利用了不同分子在溫度改變下構(gòu)象的差別進行分離。

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于2009年6月1日正式實施的《中華人民共和國食品安全法》是我們國家保證食品安全、保障公眾身體健康和生命安全的法律基礎(chǔ)?！妒称钒踩ā穼κ称钒踩母鱾€環(huán)節(jié)包括食品安全標準，食品生產(chǎn)經(jīng)營及食品驗等都有了明確的規(guī)定，在此基礎(chǔ)上各個部門都圍繞食品頒布了相關(guān)細則，其中近期由國家質(zhì)總局頒布的《企業(yè)生產(chǎn)乳制品許可條件審查細則》(2010版)及《企業(yè)生產(chǎn)嬰幼兒配方乳粉許可條件審查細則》(2010版)引起了廣泛的關(guān)注，此審查細則中明確規(guī)定了乳制品生產(chǎn)企業(yè)必須自的項目，尤其是微生物驗項目。

食品中微生物測項目主要包括：食源性致病菌測、衛(wèi)生指標菌的計數(shù)及針對特殊產(chǎn)品(如UHT(超高溫消毒奶))進行的商業(yè)無菌測等。相對理化測而言，微生物測具有耗時長(我們要測的目標微生物通常以數(shù)量極低的狀態(tài)存在，為達到測限度需要長時間的增菌過程)、測過程復雜(食品種類總多，菌群組成不同，雜菌影響目標菌測，且需要鑒定是否是我們要測的目標菌)，方法傳統(tǒng)、自動化程度低等特點。近年來，針對上述特點，國內(nèi)外關(guān)于微生物快速，自動化測的研究突飛猛進，相關(guān)的產(chǎn)品層出不窮，在此，本文對食品微生物快速自動化測方法研究進展情況做簡單概述。

食源性致病菌測

目前測比較常見的食源性致病菌主要包括沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌0157：H7、單增李斯特菌等，針對這些致病菌的測以樣品中是否有該致病菌存在來定性表示，如果有的話，還需要做進一步的鑒定及分型試驗。

對于食源性致病菌測，目前常見的方法有：國標規(guī)定的傳統(tǒng)平板測法、穩(wěn)定的免疫學測方法及現(xiàn)代分子生物學測方法等。結(jié)合這些測方法，國內(nèi)外不斷涌現(xiàn)各種新型食源性致病菌測產(chǎn)品，其特點傾向于快速，準確及自動化。

以沙門氏菌測為例，傳統(tǒng)國標測方法需要4天左右的時間進行定性測，而采用新的選擇性增菌技術(shù)如美國GDS的Pickpen免疫磁珠分離技術(shù)，結(jié)合PCR-Rotor-Gene分子生物測技術(shù)，可以在1天的時間內(nèi)完成對沙門氏菌的定性測。

法國生物梅里埃的VIDAS系統(tǒng)是依托免疫學方法研制的致病菌測系統(tǒng)，特點為測穩(wěn)定，自動化程度高，該系統(tǒng)也是致病菌測中的常用方法。

金標測條同樣也采用了抗原抗體免疫測的原理，近年來的技術(shù)發(fā)展已經(jīng)克服了測結(jié)果不穩(wěn)定等缺點，如美國SDI及杜邦快力康的金標測條，采用了最先進的噬菌體技術(shù)，將噬菌體做成抗體來測指標菌抗原，具有測快，結(jié)果靈敏度特異性高、不需儀器等特點，適用于緊急條件下的快速測。

同時，由于很多測機構(gòu)都配備有酶標儀，因此96孔板測方法以其結(jié)果穩(wěn)定，處理通量大等特點被大量應用。

此外，最近國外出現(xiàn)了一種新的超快速食源性病原測技術(shù)，它結(jié)合了生物芯片，分子生物學，微射流和微電子技術(shù)，可在一張芯片上測18種食源性病原，包括常見食源性指標菌及諾如病毒，輪狀病毒等常見病毒，相信在不久的將來該技術(shù)可以大量應用。

對于致病菌測而言，當其定性測的結(jié)果呈陽性時，需要對其進行鑒定試驗，法國梅里埃的微生物生化鑒定試劑條API和全自動微生物生化鑒定系統(tǒng)Vitek2Compact是微生物鑒定的拳頭產(chǎn)品，另外美國BD公司的CrystaI和鳳凰100也都是依據(jù)伯杰氏手冊原理研制而成的微生物生化鑒定系統(tǒng)。美國Biolog微生物生化鑒定系統(tǒng)采用碳源同化反應原理，也可用于微生物鑒定工作。

衛(wèi)生指標菌測

食品中常見的衛(wèi)生指標菌雖然不會引起食品風險，卻能夠很好地反映出食品的清潔度，隨著我們食品工業(yè)的發(fā)展，對于快速、準確，直接的指標菌計數(shù)方法的需求日益迫切。

法國梅里埃的Tempo全自動微生物定量分析系統(tǒng)，采用MPN方法，可以自動對菌落總數(shù)等進行分析，但在分析時間及單次分析成本上需要改進；法國AES公司的全自動化系統(tǒng)可很好地滿足對牛奶、發(fā)酵奶制品和果汁等的測需求，并且該技術(shù)可逐個測樣品中的活細胞，幾分鐘內(nèi)就可以得到定量的測結(jié)果。

另外美國BioContrel公司的Simplate在國外也常用衛(wèi)生指標菌測，該技術(shù)采用改良MPN技術(shù)，將傳統(tǒng)的MPN方法中的9管換成84孔測板，并利用特制顯色培養(yǎng)基使陽性孔呈現(xiàn)出特殊顏色，定量地測常規(guī)微生物。

當然，對于衛(wèi)生指標菌的定量測不可不提美國3M公司，其Petrifilm產(chǎn)品已在我國使用近10年，最近很多公司都有類似產(chǎn)品出現(xiàn)，尤其日本公司居多。從產(chǎn)業(yè)的角度而言，該類產(chǎn)品由于原理并不復雜且價格不高，因而得到廣泛應用。

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關(guān)鍵詞：中成藥；木香順氣丸；微生物限度；驗證

Abstract：Objective To provide a method of the microbial limit test for proprietary chinese medicine Muxiangshunqi Pill and carry out the verification of the method test of method.Methods Routine method，medium dilution method（0.5ml/dish and 0.2ml/dish）were adopted for the test according to test methods of Chinese Pharmacopoeia 2010 edition of a microbial limit.Results Based on recovery test，the number of bacteria were tested by medium dilution method（0.2ml/dish），molds and yeasts were tested by routine method，and using the toutine method for the inspection of the control bacteria.Conclusion The method can be used for microbial limit for proprietary chinese medicine Muxiangshunqi Pill.

Key words：Proprietary chinese medicine；Muxiangshunqi Pill；Microbial limit；Validation

木香順氣丸是由木香、砂仁、香附、檳榔、甘草、陳皮、厚樸、枳殼、蒼術(shù)、青皮等中藥組成的復方制劑，主治行氣化濕，健脾和胃，用于濕濁中阻、脾胃不和所致的胸膈痞悶、脘腹脹痛、嘔吐惡心、噯氣納呆。按照《中國藥典》2010年版規(guī)定，在進行藥品中微生物限度檢查時，只有在該檢驗條件下的樣品濃度不足以抑制污染微生物的生長時，才能使供試品中的微生物的得到真實反映，從而保證檢驗結(jié)果的科學性和準確 性[1]。對于具有抑菌作用的品種，必須采取一定的措施，如培養(yǎng)基稀釋法、離心沉淀法、薄膜過濾法或其中2種方法連用，消除其抑菌作用后，再進行檢驗，以保證方法的可靠性[2]。在進行木香順氣丸微生物限度檢查時發(fā)現(xiàn)其具有一定的抑菌作用，故建立了木香順氣丸微生物限度檢查方法，為該類品種制定微生物限度標準提供了科學依據(jù)。

1儀器與材料

1.1儀器MJ-Ⅱ 型霉菌培養(yǎng)箱（生產(chǎn)企業(yè)：上海一恒科技有限公司），SPX-150型生化培養(yǎng)箱（生產(chǎn)企業(yè)：上海金慧科電子有限公司），SPX-250B-Z型生化培養(yǎng)箱（生產(chǎn)企業(yè)：上海博迅實業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠）。

1.2樣品 木香順氣丸（陜西利君現(xiàn)代中藥有限公司，規(guī)格：8袋/盒）。

1.3稀釋液 0.9%無菌氯化鈉溶液（用于菌液稀釋）；pH 7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液（用于供試品制備）（按中國藥典方法制備，高壓蒸汽滅菌法滅菌）

1.4培養(yǎng)基 營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（批號140807）、玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基（批號140904）、膽鹽乳糖培養(yǎng)基（批號140912）、MUG培養(yǎng)基（批號150413）、乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基（批號150310）、改良馬丁液體培養(yǎng)基（批號140905）、氯化鈉蛋白胨緩沖液（批號141213）均由北京陸橋技術(shù)有限公司生產(chǎn)。

1.5陽性對照菌 枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）[CMCC（B）63501]、金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）[CMCC（B）26003]、大腸埃希菌（Escherichia coli）[CMCC（B）44102]、白色念珠菌（Candida albicans）[CMCC（F）98001]、黑曲霉（Aspergillus niger）[CMCC（F）98003]均由陜西省食品藥品檢驗所提供。

2方法

2.1菌液制備 接種大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌至營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上，35℃培養(yǎng)24 h；接種白色念珠菌至改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基上，25℃培養(yǎng)48 h，以上培養(yǎng)物均用0.9%無菌氯化鈉溶液制成50～100 cfu/ml的菌懸液；接種黑曲霉菌至改良馬丁瓊脂斜面25℃培養(yǎng)5 d（用0.05%聚山梨酯80的0.9%無菌氯化鈉溶液洗脫孢子，標準管比濁），再將培養(yǎng)物用0.05%聚山梨酯80的0.9%無菌氯化鈉溶液制成50～100 cfu/ml的菌懸液。

2.2供試品溶液制備稱取供試品10 g，研細，加稀釋液100 ml，制備成1∶10供試液。

2.3常規(guī)法

2.3.1試驗組 取1∶10供試液1 ml和試驗菌50～100 cfu，采用常規(guī)法進行細菌、霉菌和酵母菌數(shù)的測定。

2.3.2菌液組 取試驗菌液1 ml，采用常規(guī)法測定所加試驗菌數(shù)。

2.3.3供試品對照組 取1∶10供試液1 ml注入平皿中，不加試驗菌，傾注相應培養(yǎng)基，采用常規(guī)法測定供試品的本底菌數(shù)。

2.3.4回收率的計算 按如下方法計算試驗組的加菌回收率。

首先，用試驗組的平均菌落數(shù)減去供試品對照組的平均菌落數(shù)，然后用這個結(jié)果再除以菌液組的平均菌落數(shù)，最后再乘以100%，得到回收率結(jié)果[4]。

即：試驗組菌回收率（%）=[（試驗組菌數(shù)-供試品對照組菌數(shù)）/菌液組菌數(shù)]×100%

2.3.5結(jié)果 試驗結(jié)果表明，試驗組金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌的回收率均70%，可采用常規(guī)法進行霉菌和酵母菌數(shù)測定，見表1。

2.4培養(yǎng)基稀釋法（0.5 ml/皿）

2.4.1取1∶10的供試液，采用0.5 ml/皿，分別加入試驗菌金黃色葡萄球菌和枯草芽孢桿菌50～100 cfu，同常規(guī)法進行試驗。

2.4.2回收率的計算：同常規(guī)法。

2.4.3結(jié)果 試驗結(jié)果表明，實驗組金黃色葡萄球菌的回收率>70%，可采用培養(yǎng)基稀釋法（0.5 ml/皿）進行測定，驗證方法通過；而試驗組枯草芽孢桿菌的回收率

2.5培養(yǎng)基稀釋法（0.2 ml/皿）

2.5.1取1∶10的供試液，采用0.2 ml/皿，加入試驗菌枯草芽孢桿菌50～100 cfu，同常規(guī)法進行試驗。

2.5.2回收率的計算：同常規(guī)法。

2.5.3結(jié)果 試驗結(jié)果表明，實驗組枯草芽孢桿菌的回收率>70%，可采用培養(yǎng)基稀釋法（0.2 ml/皿）進行測定，驗證方法通過，見表3。

2.6控制菌檢查方法驗證（常規(guī)法） 當建立產(chǎn)品的微生物限度檢查法時，應進行控制菌檢查方法的驗證，以確認所采用的方法是否適合于該藥品的控制菌檢查。驗證時，依各品種項下微生物限度標準中規(guī)定檢查的控制菌選擇相應驗證的菌株。驗證大腸埃希菌和大腸菌群時，采用的驗證菌株都是大腸埃希菌。

2.6.1大腸埃希菌 試驗組：取菌數(shù)回收率測定項下1∶10的供試液10 ml和大腸埃希菌試驗菌液10～100 cfu，接種至100 ml的膽鹽乳糖培養(yǎng)基中，依據(jù)大腸埃希菌檢查法試驗。陰性對照組：取稀釋液10 ml加入到膽鹽乳糖培養(yǎng)基100 ml中，依據(jù)大腸埃希菌檢查法試驗。

2.6.2大腸菌群 試驗組：取菌數(shù)回收率測定項下1∶10的供試液1 ml和大腸埃希菌試驗菌液10～100 cfu，加入到10 ml的乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基管中，依據(jù)大腸菌群檢查法試驗。陰性對照組：取稀釋液1 ml加入到10 ml乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基管中，依據(jù)大腸菌群檢查法試驗。

2.6.3結(jié)果 試驗結(jié)果表明，可采用常規(guī)法進行控制菌（大腸埃希菌和大腸菌群）的檢查，見表4。

2.7結(jié)果 本品按照《中國藥典》2010年版一部附錄微生物限度檢查法要求，進行方法學驗證試驗，結(jié)果可采用培養(yǎng)基稀釋法（0.2 ml/皿）進行細菌菌數(shù)檢查，可采用常規(guī)法法進行霉菌和酵母菌數(shù)檢查；可采用常規(guī)法進行大腸埃希菌和大腸菌群的控制菌檢查[5]。

3 討論

由于中成藥含有多種成分，其中任何成分具有抑菌作用，均可能影響微生物限度檢查的準確性，常規(guī)法可用于無抑菌作用或抑菌作用弱的藥物，而對抑菌作用較強的藥物，可采用培養(yǎng)基稀釋法減少藥品中抑菌成分的數(shù)量，從而消除其對細菌、霉菌與酵母菌生長的影響[3]。因此藥品在進行微生物限度檢查前，要排除自身抑菌作用所帶來的干擾，這樣測出的結(jié)果才能可靠、有效。中成藥木香順氣丸處方中所含有的木香、蒼術(shù)、甘草、厚樸提取物對金黃色葡萄球菌都有明顯的抑制作用[4-7]，蒼術(shù)和厚樸提取物還對枯草芽孢桿菌有明顯抑制作用[5，8]。而這幾種中藥材作為木香順氣丸的主要成分，其對微生物限度檢查的影響有多大無法確定，故采用依次漸進的辦法來確定最為合適的檢查方法。從實驗結(jié)果表明，木香順氣丸對金黃色葡萄球菌和枯草芽孢桿菌有一定的抑制作用，這與實驗前對成分抑菌作用的分析一致，因此，在進行中成藥微生物限度檢測前，進行必要的成分分析，有一定的參考價值。

參考文獻：

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[關(guān)鍵詞] 頭孢卡品酯膠囊; 薄膜過濾法; 平皿法; 培養(yǎng)基稀釋法

[中圖分類號] R978.1+1 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-9701(2010)13-86-02

頭孢卡品酯膠囊是由頭孢卡品酯和輔料組成的膠囊劑,為第四代口服頭孢類抗生素。具有廣譜抗菌活性,對耐青霉素(含中等程度耐藥)的肺炎鏈球菌的活性很強,對很多耐抗生素的病原菌均有良好療效。

由于該藥具有很強的抗菌作用,需要通過驗證來建立它的微生物限度檢查方法。

本試驗用2005年版中國藥典規(guī)定的3株細菌(大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌)、2株真菌(黑曲霉、白色念珠菌)[1]對三批頭孢卡品酯膠囊進行了微生物限度檢查法的驗證試驗,以確認所采用的方法是否適合于該藥品的細菌、霉菌、酵母菌數(shù)的測定和控制菌檢查及檢查藥品本身污染微生物的狀況,結(jié)果報道如下。

1 實驗材料

1.1 儀器

HTY-2000A型集菌儀、泵管FPY330型(批號20080622)、HTY-K型培養(yǎng)器專用震蕩儀、HTY反復使用集菌培養(yǎng)器(杭州泰林生物技術(shù)設(shè)備有限公司);LRH-250生化培養(yǎng)箱(上海索普儀器有限公司)。

1.2 試藥

營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基(批號071129)、營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基(批號071119)、玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基(批號071217)、BL培養(yǎng)基(批號071210)、MUG培養(yǎng)基(批號080716)北京三藥科技開發(fā)公司;靛基質(zhì)試驗歐-波試液(批號080730)江蘇宜興永信生物有限公司;0.9%無菌氯化鈉溶液、pH 7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液(揚子江藥業(yè)集團有限公司輸液車間配制)。

1.3 菌種

大腸埃希菌[CMCC(B)44102];金黃色葡萄球菌[CMCC(B)26003];枯草芽孢桿菌[CMCC(B)63501];黑曲霉[CMCC(F)98003];白色念珠菌[CMCC(F)98001]均由中國藥品生物制品檢定所提供。

2 方法

2.1 菌液制備[2]

分別接種大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌的新鮮培養(yǎng)物至營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中在30～35℃中培養(yǎng)18～24h;接種白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物至改良馬丁培養(yǎng)基中在23～28℃中培養(yǎng)24～48h,上述培養(yǎng)物用0.9%無菌氯化鈉溶液稀釋成含菌數(shù)為(50～100)cfu/mL的菌懸液;另外接種黑曲霉的新鮮培養(yǎng)物至改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基中,在23～28℃中培養(yǎng)5d,加入5mL 0.9%無菌氯化鈉溶液,將孢子洗脫后,用0.9%無菌氯化鈉溶液稀釋成含孢子數(shù)為(50～100)cfu/mL的菌懸液,備用。

2.2 供試液制備

供試液:取供試品5g,加入已滅菌的吐溫80約5mL,慢慢加入45℃的pH 7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液至100mL,邊加邊攪拌,保溫振搖使混勻,靜置后的上清液作為1∶20的供試液。

稀釋劑對照液:分別取滅菌的吐溫80約5mL,分別加入約5000～10000CFU的菌懸液,慢慢加入45℃的pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液至100mL,邊加邊攪拌,使混勻,作為含菌量(50～100)cfu/mL的稀釋劑對照液。

各試驗菌分別制備一份。

2.3 細菌、霉菌及酵母菌常規(guī)法計數(shù)方法

2.3.1 試驗組 取 1∶20 的供試液2mL,每1毫升供試液和(50～100)cfu/mL試驗菌同時加入平皿中,立即傾注相應規(guī)定的培養(yǎng)基,每株試驗菌平行制備2個平皿,按平皿法測定菌落數(shù)。

2.3.2 菌液組 分別取各備用試驗菌,加入與試驗組等量菌液,測定每一菌株所加的試驗菌數(shù)。

2.3.3 供試品對照組 方法同試驗組,不加試驗菌,測定供試品的本底菌數(shù)。

2.3.4 稀釋劑對照組 取稀釋劑對照液代替供試品,按試驗組的方法操作,以考察供試液制備過程中微生物受影響的程度。

2.3.5 菌回收率計算 試驗組回收率=(試驗組的平均菌落數(shù)-供試品對照組的平均菌落數(shù))/(菌液組的平均菌落數(shù))×100%;稀釋劑對照組回收率=(稀釋劑對照組的平均菌落數(shù)-供試品對照組的平均菌落數(shù))/(菌液組的平均菌落數(shù))×100%。

2.4 細菌薄膜過濾法計數(shù)方法

2.4.1 試驗組 取供試液1mL,至含有pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液約100mL的濾筒內(nèi),振搖過濾,用45℃ pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液振蕩沖洗,每次50mL,沖洗量分別為300mL、400mL、500mL,在最后一次沖洗液中加入(50～100)cfu/mL的菌懸液。過濾后取出濾膜,菌面朝上,貼于營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上,于30～35℃倒置培養(yǎng),以48小時點計菌落數(shù),各制備一個平皿。

2.4.2 菌液組 分別取各備用試驗菌各1mL,注入平皿中,立即傾注營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基約15～20mL,混勻凝固,于30～35℃倒置培養(yǎng),以48小時點計菌落數(shù)。各平行制備2個平皿。

2.4.3 供試品對照組 方法同2.4.1,不加菌懸液。

2.4.4 稀釋劑對照組 取稀釋劑對照液代替供試液,操作方法同2.4.1。

2.5 控制菌檢查方法

2.5.1 常規(guī)法

2.5.1.1 試驗組 取供試液20mL,大腸埃希菌菌懸液1mL,置250mL錐形瓶中,加入約100mL的膽鹽乳糖增菌培養(yǎng)基,于35～37℃培養(yǎng)18～24h。

2.5.1.2 陰性菌對照組 方法同試驗組,用金黃色葡萄球菌代替大腸埃希菌,依法測定。

2.5.2 薄膜過濾法

2.5.2.1 試驗組 取供試液20mL,至250mL pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液中,振搖過濾,然后用45℃ pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液振蕩沖洗,每次50mL,沖洗量為300mL,在最后一次沖洗液中加入(50～100)cfu/mL的大腸埃希菌菌懸液1mL,過濾后取出濾膜,置250mL錐形瓶中,加入約100mL的膽鹽乳糖增菌培養(yǎng)基,于35～37℃培養(yǎng)18～24h。

2.5.2.2 陰性菌對照組 方法同試驗組,用金黃色葡萄球菌代替大腸埃希菌,依法測定。

2.5.3 薄膜過濾和培養(yǎng)基稀釋法

2.5.3.1 試驗組 取供試液20mL,至250mL pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液中,振搖過濾,然后用45℃ pH 7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液振蕩沖洗,每次50mL,沖洗量為300mL,在最后一次沖洗液中加入(50～100)cfu/mL的大腸埃希菌菌懸液1mL,過濾后取出濾膜,置250mL錐形瓶中,加入約200mL的膽鹽乳糖增菌培養(yǎng)基,于35～37℃培養(yǎng)18～24h。

2.5.3.2 陰性菌對照組 方法同試驗組,用金黃色葡萄球菌代替大腸埃希菌,依法測定。

3 結(jié)果

3.1 細菌、霉菌及酵母菌常規(guī)法計數(shù)方法的驗證

見表1。

從表1結(jié)果可以看出,霉菌及酵母菌的回收率>70%,可采用平皿法;三株細菌的回收率均70%,由此說明該供試品有很強的抑制細菌的作用,應重新選擇細菌計數(shù)方法的驗證。

3.2 細菌薄膜過濾法計數(shù)方法的驗證

見表2。

從表2可以看出,采用薄膜過濾法檢驗頭孢卡品酯膠囊,沖洗量300mL/膜,稀釋劑對照組、試驗組的菌回收率均高于70%,符合驗證要求,說明經(jīng)薄膜過濾后可以消除頭孢卡品酯膠囊的抑制細菌的活性,因此頭孢卡品酯膠囊的細菌數(shù)測定可采用薄膜過濾法測定。

3.3 控制菌檢查方法驗證結(jié)果

見表3。

從表3可以看出,控制菌(大腸埃希菌)采用薄膜過濾法和培養(yǎng)基稀釋法檢查結(jié)果符合規(guī)定。

4 結(jié)論

通過對本品進行細菌、霉菌及酵母菌計數(shù)方法的驗證,可以確認采用平皿法適用于頭孢卡品酯膠囊的霉菌及酵母菌的測定;采用薄膜過濾法適用于頭孢卡品酯膠囊的細菌的測定。

通過對本品控制菌檢查方法的驗證認為,頭孢卡品酯膠囊的大腸埃希菌檢查采用薄膜過濾和培養(yǎng)基稀釋法檢查。

[參考文獻]

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[2] 中國生物制品檢定所編. 中國藥品檢驗標準操作規(guī)范[M]. 北京:中醫(yī)藥科技出版社,2005:335-341.

篇5

關(guān)鍵詞：醫(yī)療器械 微生物學檢驗 過程 方法

0 引言

我國醫(yī)療器械行業(yè)伴隨著國家對此的大力支持還有科技的不斷進步而快速發(fā)展著，醫(yī)療器械在診斷疾病和治療疾病等方面都得到了廣泛的應用。應用的廣泛使得人們也提出了這樣的問題：醫(yī)療器械的衛(wèi)生以及安全方面是否合格和達標？會不會對人產(chǎn)生負面的影響？

現(xiàn)代科學技術(shù)在不斷地向前發(fā)展著，這也必將帶動醫(yī)療方法的進步，而越來越多的醫(yī)療器械為我們指明了一個新的且十分重要的研究方向――醫(yī)療器械的微生物檢驗。

1 微生物的概念

用人的肉眼無法分別的微小生物統(tǒng)稱為微生物。微生物的結(jié)構(gòu)十分簡單，且活性極強，數(shù)目龐大。在二十世紀中后期，一套包括顯微技術(shù)以及純培養(yǎng)技術(shù)和培養(yǎng)皿等在內(nèi)的微生物學檢驗成為了一個獨立學科。

2 采集檢驗樣品

筆者隨機對十家生產(chǎn)醫(yī)療器械的企業(yè)進行了樣品的隨機抽取，并對樣品進行了調(diào)查以及分析，為的是對于一次性使用醫(yī)療器械產(chǎn)品的微生物學指標的檢驗現(xiàn)狀予以較為精確的把握。

首先，以隨機抽樣作為樣品的選取辦法，盡力保證選取的樣品可以代表被檢驗的物質(zhì)。其次，在進行采樣環(huán)節(jié)的時候，筆者先對這些企業(yè)的生產(chǎn)流程以及周圍的環(huán)境等基本的情況加以了解和把握。對其可能存在的污染源等等進行初步審視和檢查。這樣做也可以對這些樣本的衛(wèi)生狀況及其質(zhì)量等方面進行初步的反映。

對樣品的選取必須要依照無菌操作的程序要求，要對樣品進行滅菌處理，將環(huán)境當中的微生物污染等進行避免，為了免除殺掉樣品中的微生物這一隱患，包括所用的用具在內(nèi)，一定不可以用酒精等等來進行處理。要使樣品當中的微生物狀況保持原來的樣子，在檢驗進行之前一定不能發(fā)生變動。要對項目和分析方法還有被檢驗物的均勻程度等要求為參照進行分析，以此為依據(jù)來確定采樣的數(shù)量。為檢驗和復檢以及留樣，樣品需要一式三份。

3 檢驗樣品管理程序

迄今為止，判定某種產(chǎn)品的質(zhì)量主要是通過檢驗該產(chǎn)品的樣品實現(xiàn)的，如果樣品檢驗合格就推斷所檢批次的產(chǎn)品合格，反之就不合格。樣品在這個推理鏈中起著紐帶的作用，應確保其可信度或可靠度。樣品從采集到檢驗以及最后的處置，經(jīng)歷了多個環(huán)節(jié)，如果失控，隨時都能改變其可信度或可靠度。因此，必須對樣品進行規(guī)范、科學和嚴格的管理。規(guī)范的樣品管理程序一般包括采樣管理、運送過程管理，輸入管理（接收、標識、貯存）輸出管理（確認、準備、流轉(zhuǎn)）等環(huán)節(jié)。

根據(jù)ISO/IEC-17025實驗室國家認可對樣品管理的要求，實驗室（特別是第三方實驗室）在本單位的質(zhì)量管理體系中，應根據(jù)上述環(huán)節(jié)建立如下的樣品管理程序：委托書任務單采樣標識運送接收唯一性標識貯存、準備、確認流轉(zhuǎn)處置。

需要注意的是：在對樣品進行檢驗的過程當中所使用的一切器皿和試劑還有溶液是必須要經(jīng)過滅菌處理的;在檢驗實驗室當中可能會使用到的一切設(shè)備都應當對其進行校正和檢查;在采集選取完樣品之后，要以國家的標準檢驗方法為參照，保持負責和認真的態(tài)度來對樣品檢驗外觀，一定要注意，樣品不要受到環(huán)境中的微生物的污染;必須選用被玻璃器皿蒸餾過的蒸餾水抑或是無離子水來供培養(yǎng)基以及試劑所用;在結(jié)束對選取的樣本的檢驗工作之后，要立即清洗攜帶細菌的器皿等。

4 醫(yī)療器械的微生物學檢驗方法

細胞以及分子等等都已經(jīng)被微生物學檢驗所深入，在對醫(yī)療器械進行的微生物學檢驗中已經(jīng)利用了不少新的方法以及技術(shù)。在微生物學檢驗的項目當中，當數(shù)細菌學檢驗為推廣廣度最廣的項目了。細菌檢驗的最為重要的方法就是細菌形態(tài)學檢查了。該檢查可以以其形態(tài)一級結(jié)構(gòu)還有染色反應為參照根據(jù)，也是細菌的分類以及鑒定的基本。

4.1 顯微鏡檢查 顯微鏡可以觀察到人類肉眼無法分辨的個體及其微小的細菌。一般由兩部分組成，一是光學顯微鏡;二是電子顯微鏡，其中光學顯微鏡是用來觀察一般的形態(tài)以及結(jié)構(gòu)的，只用使用電子顯微鏡才可以觀察到新的內(nèi)部結(jié)構(gòu)。另外，光學顯微鏡主要包括普通光學顯微鏡、暗視野顯微鏡、熒光顯微鏡、微分干涉差顯微鏡等，電子顯微鏡主要包括透射電子顯微鏡、掃描電子顯微鏡等。

4.2 染色標本檢查 細菌和周圍的環(huán)境在經(jīng)過染色之后會產(chǎn)生比較鮮明的對比，細菌的大小以及排列等特征以及其特殊的結(jié)構(gòu)會經(jīng)由光學顯微鏡觀察到。細菌染色的程序大多是：干燥-固定-媒染-脫色-復染。

染色標本檢查常用的方法為以下幾種：

4.2.1 單染色法。用一種染料將細菌和周圍物體染成同一種顏色。細菌經(jīng)單染色法處理后，可觀察其形態(tài)、排列、大小及簡單的結(jié)構(gòu)，但不能顯示各種細菌染色性的差異。

4.2.2 復染色法。用兩種或以上的染料染色的方法。常用的包括革蘭染色法以及抗酸染色法。

革蘭染色是細菌學中最常用的染色方法。除糞便、血液等極少數(shù)標本外，絕大多數(shù)標本在分離培養(yǎng)之前都要進行革蘭染色、鏡檢。 進行革蘭染色可鑒別細菌，初步識別細菌，縮小范圍，有助于進一步鑒定。

抗酸染色分為抗酸性細菌和非抗酸性細菌兩類。

4.2.3 熒光染色。熒光染色法敏感性強，效率高而且容易觀察結(jié)果，有很大的實用價值。

除以上所述染色方法外，還有鞭毛染色、異染顆粒染色等等幾種。

4.3 不染色標本檢查 細菌標本不經(jīng)染色直接鏡檢，可觀察生活狀態(tài)下細菌的形態(tài)及其運動情況，一般常有懸滴法、壓滴法。懸滴法是在凹型載玻片的凹窩周圍涂上少量的凡士林，同時在干凈的蓋玻片的中間用接種環(huán)點少量無菌水，在其中再點上少許培養(yǎng)好的細菌。如果液體培養(yǎng)物就直接將培養(yǎng)液滴一小滴在蓋玻片上。然后，將此蓋玻片翻過來，使液滴下懸，正好使液滴容納在凹型載玻片的凹窩中，輕輕地按一下，使其和凡士林粘緊。而壓滴法是用接種環(huán)挑取細菌培養(yǎng)液或細菌生理鹽水懸液兩環(huán)，置于潔凈載玻片中央，覆以蓋玻片。制片時，菌液要適量，不可外溢，并避免產(chǎn)生氣泡。

4.4 基因探針技術(shù) 基因探針技術(shù)的作用原理是同源序列的核酸鏈在一定條件下能夠形成穩(wěn)定的互補DNA、RNA或DNA、DNA鏈條，此時可以利用具備高度特異性片段制成的基因探針來對不同細菌進行識別?；蛱结樉哂袦p少因基因片段長度的多態(tài)性導致的分析條帶數(shù)的增多，例如法國生物一梅里埃公司的GEN、PROBE基因探針檢測系統(tǒng)，對特定菌落進行分離并進行確證試驗僅需要30分鐘。這項技術(shù)的缺點是對目標菌以外的細菌無法檢測識別。

4.5 細菌直接計數(shù)法 這種方法主要包括流式細胞儀（flow cytometry，F(xiàn)CM）和固相細胞計數(shù)（solid phase cytometry，SPC）法。這種方法的原理就是利用激光作為發(fā)光源，光束在聚焦、調(diào)整后對樣品流進行垂直照射，這樣被熒光染色的細胞就能夠產(chǎn)生散色光和激發(fā)熒光。光散射的信號能夠標志細胞體積的大小，信號強度則是細胞膜表面抗原的輕度或者核內(nèi)物質(zhì)濃度的反應，基于此散射光信號和熒光信號就能夠?qū)ξ⑸锏拇笮?、?shù)量、形狀進行預估。這種方法的優(yōu)點是靈敏度高，且可以對細菌的性質(zhì)與數(shù)量同時鑒定。目前這項技術(shù)可以對細菌總數(shù)、致病性沙門菌、大腸埃希氏菌等進行檢測。對特定細胞進行技術(shù)統(tǒng)計，就能夠?qū)Σ煌毎M行精確度較高的檢測。進行過濾樣品的操作之后，實驗者可以存留的微生物進行熒光標記，用激光掃描儀就可以對其鑒別。這種方法的優(yōu)點就是對生長速度慢的微生物能夠進行快速檢測，其檢測速度能夠遠高于傳統(tǒng)的平板計數(shù)法，缺點是成本較高，因此推廣使用具有一定困難。

另外，除了上述醫(yī)療器械的微生物學檢驗方法外，還存在一些準確、省時、省力和省成本的快速檢驗方法，比如即用型紙片法、生物化學技術(shù)、選擇鑒定用培養(yǎng)基法、免疫學技術(shù)、全自動微生物分析系統(tǒng)等。

5 結(jié)束語

在醫(yī)療器械的微生物學檢驗當中，以法定的標準以及方法為參照是十分重要的。在這些微生物學檢驗方法當中，應用最廣泛的當屬細菌學檢驗。不久的將來，在對于醫(yī)療器械的微生物學檢驗領(lǐng)域，更多的方法會被研究。微生物學檢驗也會更加被應用以及推廣。

參考文獻：

[1]張娟麗.淺談醫(yī)療器械的微生物學檢驗過程和方法[J].學術(shù)管理，2009，11：34.

篇6

一、財務會計在企業(yè)管理中的重要地位

1.財務會計為企業(yè)的經(jīng)營發(fā)展提供保障

對于企業(yè)而言，要想獲得長遠發(fā)展，就必須重視財務會計在企業(yè)管理中所起到的重要作用。在企業(yè)管理中，企業(yè)管理者想要了解企業(yè)當前的經(jīng)營發(fā)展狀況，最值得信賴和依靠的信息就是財務會計所提供的財務信息。也就是說財務會計能夠?qū)⑵髽I(yè)的經(jīng)濟狀況如實的反映給企業(yè)管理者。企業(yè)管理者只有實際的了解到企業(yè)的生產(chǎn)經(jīng)營狀況以及可用資金，才能夠在此基礎(chǔ)上制定企業(yè)的發(fā)展戰(zhàn)略和發(fā)展規(guī)劃。例如某制造企業(yè)近幾年發(fā)展勢頭迅猛，企業(yè)資本逐年增加，為了尋求更好的發(fā)展，這家制造企業(yè)想要兼并同一類型的另外一家制造企業(yè)，那么在此之前，作為企業(yè)的管理者就需要了解自身企業(yè)的財務狀況和市場環(huán)境，衡量自身是否有能力“吃”下這一塊“大餅”如果企業(yè)資金無法支持“兼并”活動，企業(yè)就需要放棄這項發(fā)展規(guī)劃，反之，企業(yè)資金充裕，能夠為“兼并”另一家企業(yè)提供給強有力的資金支持，那么就可以制定具體的實施計劃。由此可見，財務會計在企業(yè)管理中的重要性。

2.財務會計能夠為企業(yè)降低成本

眾所周知，隨著我國經(jīng)濟的迅速發(fā)展，企業(yè)競爭日益激烈，企業(yè)如果想要獲得長遠發(fā)展，就必須加強管理，將財務會計在企業(yè)管理中的優(yōu)勢發(fā)揮出來，不斷強化財務會計的職能。在企業(yè)管理中，財務會計不僅能夠為企業(yè)管理者提供企業(yè)當前的財務信息，還能夠通過有效的方法和手段為企業(yè)降低成本。因為企業(yè)財務會計系統(tǒng)性比較強，又存在精細化的特點，在很多業(yè)務中財務會計都占有主導地位，企業(yè)的大部分業(yè)務開展都是根據(jù)可靠地財務信息進行分析的，從成本以及效益角度來決定這項業(yè)務是否需要開展。財務會計可以直接用數(shù)字標準開衡量企業(yè)某項業(yè)務的具體指標，設(shè)置一定的額度要求業(yè)務人員去完成，企業(yè)還可以根據(jù)這個具體的指標為依據(jù)，為企業(yè)降低經(jīng)營成本。而對于企業(yè)管理者而言，也可以根據(jù)財務會計提供的數(shù)據(jù)對企業(yè)的經(jīng)營發(fā)展狀況進行分析，不斷加強對產(chǎn)品的成本監(jiān)控金和企業(yè)產(chǎn)品創(chuàng)新，節(jié)約企業(yè)的生產(chǎn)成本。與此同時，為了降低企業(yè)成本，根據(jù)財務會計提供的信息，企業(yè)可以在工資方面、考勤制度方面等加強管理，減少人資成本的投入。

3.財務會計有利于保證企業(yè)的財產(chǎn)安全

在企業(yè)管理中，財務會計的重要作用不僅僅表現(xiàn)于資金的使用上，還表現(xiàn)在對企業(yè)的各項財產(chǎn)物資的保管和監(jiān)督使用上。對于企業(yè)而言，如果想要良好的發(fā)展，就必須具有一定的經(jīng)濟基礎(chǔ)，所以企業(yè)的物質(zhì)資產(chǎn)在企業(yè)的生產(chǎn)和經(jīng)營過程中至關(guān)重要。明確財務會計工作，不僅僅是要建立健全企業(yè)的財產(chǎn)管理考核制度，還要完善企業(yè)物資的進出、轉(zhuǎn)移、領(lǐng)用等手續(xù)，及時做好物資財產(chǎn)的變更登記，同時為了防止企業(yè)財產(chǎn)遭受不明損失，還要定期對企業(yè)的物質(zhì)資產(chǎn)進行盤點，這樣做，不僅能夠隨時掌握企業(yè)物質(zhì)資產(chǎn)的流動情況，還能夠直接找到相關(guān)的物質(zhì)資產(chǎn)管理的負責人，避免出現(xiàn)企業(yè)物質(zhì)資產(chǎn)流失，但是問責不到人的情況。這種做法對于保證企業(yè)的財產(chǎn)安全至關(guān)重要。在企業(yè)的管理中，任何一個部分在企業(yè)的發(fā)展中都起著十分重要的作用，而財務會計本身作為企業(yè)中與各個部門聯(lián)系密切息息相關(guān)的部分，在企業(yè)的經(jīng)營發(fā)展中起到的重要性作用更是不言而喻?？偠灾攧諘嫀熎髽I(yè)發(fā)展的基礎(chǔ)，直接關(guān)系著企業(yè)的將來發(fā)展。因此，作為企業(yè)經(jīng)營管理者必須重視財務會計在企業(yè)管理中的重要地位和作用。

二、企業(yè)財務會計存在的問題

1.企業(yè)經(jīng)營管理者對財務會計缺乏足夠的重視

我國的大部分企業(yè)領(lǐng)導者對于財務會計管理工作都缺乏足夠的重視，這就導致企業(yè)的財務會計工作流程、操作程序過于表面化。有的企業(yè)領(lǐng)導者對于財務部門的要求相對比較簡單，只要每個月按時上交企業(yè)財務報表就可以了，對于財務會計具體的工作內(nèi)容并沒有明確的要求和指示。甚至有些企業(yè)因為一些特殊的原因，要求相關(guān)財務人員編制虛假的含水份的財務報表，以此來達到自己目的。這些行為對于企業(yè)的經(jīng)營發(fā)展而言，無疑是讓其“慢性自殺”因為在企業(yè)經(jīng)營管理中，只有企業(yè)經(jīng)營管理者了解真實的財務數(shù)據(jù)信息，才能夠?qū)ζ髽I(yè)當前的經(jīng)營狀況有所了解，才能夠針對當前現(xiàn)狀制作適宜有效的戰(zhàn)略發(fā)展規(guī)劃。反之，如果這些財務會計信息存在虛假情況，那么企業(yè)管理者根據(jù)這些虛假信息所作出的決策和企業(yè)戰(zhàn)略發(fā)展規(guī)劃也一定是不正確的，這對于企業(yè)的發(fā)展極其不利。出現(xiàn)這種問題的原因主要是因為總公司對于分公司的任務考核標準不明確，還有就是分公司的企業(yè)管理人員對于自身的位置缺乏科學的認識，往往為了實現(xiàn)自身利益最大化，選擇做假賬應付上級。因此，作為企業(yè)管理者必須要對企業(yè)真實的財務信息進行全面的了解，通過真實有效的財務數(shù)據(jù)分析了解企業(yè)的全面發(fā)展經(jīng)營情況，并以此為根據(jù)指定有效的發(fā)展戰(zhàn)略規(guī)劃，絕對不可以為了一時“政績”的好看，就指使財務會計人員編制虛假財務信息。

2.企業(yè)財務會計人員水平不高

在我國很多企業(yè)中的財務會計人員對于企業(yè)的經(jīng)營管理狀況和企業(yè)所發(fā)生的經(jīng)濟活動很少參與和了解。他們只是對所得到的會計書記進行加工、整理和簡單的分析，這就導致他們很難發(fā)現(xiàn)企業(yè)開展的經(jīng)濟活動中所存在的財務問題，就更別提找出相應的對策和解決的辦法了。還好有一部分財務會計人員雖然業(yè)務知識比較熟練，但是卻缺乏較高的素質(zhì)，他們總認為只要做好自己部門的事情就可以了，其他部門的事情與自己沒有關(guān)系，沒有必要花費時間和精力去關(guān)注，這對于企業(yè)員工的發(fā)展是不利的。除此之外，還有一些企業(yè)對于財務人員的聘用要求比較低，并沒有明確的規(guī)定和限制。甚至很多企業(yè)的財務會計都是企業(yè)管理者安排親近信任的單人，這就導致在財務會計崗位上出現(xiàn)一些文化水平低、專業(yè)水平不高、業(yè)務處理能力差的人。并且由于這些人員并沒有經(jīng)過系統(tǒng)性的正規(guī)性的財務培訓，他們很難堅持財務原則，對于一些違法行為并不制止和揭發(fā)，這都直接影響了財務會計信息的真實性。

三、提升財務會計在企業(yè)管理中地位和作用的方法

1.創(chuàng)新企業(yè)的財務管理觀念

在企業(yè)管理中，作為企業(yè)管理者必須創(chuàng)新企業(yè)的財務管理觀念，對財務會計工作足夠的重視，提升財務會計在企業(yè)管理中的地位，以此來促進企業(yè)更好的額發(fā)展。首先作為企業(yè)管理者制定的財務管理理念必須要符合新時期的企業(yè)機構(gòu)應發(fā)展需求，用全新的眼光和創(chuàng)新性的思維對企業(yè)進行管理，并針對性的采取具體的措施方法保證企業(yè)的長期發(fā)展。其次，企業(yè)管理者要善于運用財務信息為依據(jù)指定企業(yè)發(fā)展戰(zhàn)略和企業(yè)發(fā)展計劃，保證其決策是依據(jù)真實有效的財務信息實施的。同時企業(yè)需要建立一套適合企業(yè)自身實際經(jīng)營狀況和特點的財務數(shù)據(jù)系統(tǒng)，并更據(jù)反映的財務信息以及市場環(huán)境的變化情況，不斷調(diào)整企業(yè)的發(fā)展方向，讓企業(yè)更好的發(fā)展下去。最后企業(yè)經(jīng)營者要注重企業(yè)財務會計人員的監(jiān)督職能，設(shè)立獨立的審計部門，監(jiān)督財務會計人員的工作，保證其財務信息的真實有效性，一旦發(fā)現(xiàn)存在做假賬的情況，堅決不予姑息，對于此類財務人員必須進行嚴厲處罰?？偠灾顬槠髽I(yè)管理者只有創(chuàng)新企業(yè)管理理念，提高財務會計在企業(yè)管理中的地位和作用，為企業(yè)制定更準確的市場定位，力求生產(chǎn)出來的產(chǎn)品更加符合市場的的需求，實現(xiàn)企業(yè)利潤最大化，促進企業(yè)的良好發(fā)展。

2.建立高效的財務會計隊伍

在社會主義市場經(jīng)濟體制下，企業(yè)發(fā)展的最終目標是實現(xiàn)企業(yè)利潤的最大化。為了實現(xiàn)這一目標，必須依靠企業(yè)的經(jīng)營管理戰(zhàn)略。而在企業(yè)經(jīng)營管理中，最為重要的資源就是人力資源。因為企業(yè)的所有措施最終都要落實到人身上，都需要依靠企業(yè)的內(nèi)部員工股來實現(xiàn)。因此，對于企業(yè)的財務會計，不僅僅要從降低企業(yè)成本來出發(fā)，還應該以企業(yè)的長遠發(fā)展目標為主，靈活的運用企業(yè)資金促進企業(yè)發(fā)展。

在企業(yè)財務會計人員方面，首先企業(yè)管理者要嚴格把控“招聘關(guān)”堅決避免“關(guān)系戶”和“拉人情”的現(xiàn)象出現(xiàn)，對于一些想要“走后門”的人員一定要拒絕，防止文化水平高、不具備財務專業(yè)知識的人出現(xiàn)在財務會計崗位上，同時不要任人唯親，選擇自己親近和信任的人擔任財務會計工作，而是要根據(jù)崗位職責和崗位具體要求，選擇學歷水平高、專業(yè)知識強、業(yè)務處理熟練的人來擔任財務會計工作。其次要加強企業(yè)內(nèi)部財務會計人員的學習，增強他們的專業(yè)技能和業(yè)務處理能力，例如可以定期舉辦企業(yè)內(nèi)部財務培訓，聘請實踐經(jīng)驗豐富且理論知識比較強的專業(yè)人士進企業(yè)授課或者為企業(yè)財務人員創(chuàng)造學習機會，外派他們出國深造學習或者到企業(yè)規(guī)模比較大，財務管理水平比較高的企業(yè)去學習經(jīng)驗，還可以鼓勵企業(yè)財務人員參加相關(guān)財務職稱的考試，例如中級會計師、高級會計師、注冊會計師等。最后企業(yè)還要加強財務會計的職業(yè)素養(yǎng)，提高財務人員的素質(zhì)，作為企業(yè)的財務人員不僅要要具備較高的專業(yè)水平，還需要具備良好的個人素養(yǎng)，在做好自己本職范圍內(nèi)的工作之時，還要相對了解企業(yè)其他各部門的信息，以便在以后的工作當中更好的溝通和交流，同時也能夠為企業(yè)的發(fā)展提供更有效的建議。

四、結(jié)論

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關(guān)鍵詞：污水生物處理技術(shù)；活性污泥法；生物膜法；固定化微生物技術(shù)

中圖分類號：C35文獻標識碼： A

一污水現(xiàn)狀

1.1我國水污染的現(xiàn)狀

隨著我國城鎮(zhèn)化速度的加快, 城市生活污水的比例高達70%以上。人們?nèi)粘Ｉ町a(chǎn)生的污水主要含一些無毒有機物, 如糖類、淀粉、油脂、蛋白質(zhì)和尿素等,其中含氮、磷等植物營養(yǎng)元素較高。在一定的時間和空間范圍內(nèi),這些污染物質(zhì)大量排入天然水體并超過水體的自凈能力,導致水體富營養(yǎng)化。進入水體的各種有機物使需氧菌大量繁殖,消耗溶解氧;也使得藻類及其他水生植物異常繁殖,引起水體透明度降低,溶解氧減少直至為零。此時,需氧菌死亡,厭氧菌大量繁殖繼而分解,產(chǎn)生硫化氫、硫酸等物質(zhì),使水質(zhì)惡化、水體的功能退化、生態(tài)結(jié)構(gòu)破壞,這將會對我們所生存的環(huán)境產(chǎn)生長遠的、無法估計的影響。所以,加強城市污水處理,對于保障城市的可持續(xù)發(fā)展具有重要的社會意義和經(jīng)濟意義[2]。

1.2城市污水的來源

城市污水主要來源于城市居民生活中產(chǎn)生的污水、各工業(yè)企業(yè)在生產(chǎn)制造過程中產(chǎn)生的生產(chǎn)廢水以及城市降水和部分受污染的地表水這三方面。生活污水含有較高的有機物，如淀粉、蛋白質(zhì)、油脂、氮、磷等無機物以及含病原微生物和較多的懸浮物。各工業(yè)企業(yè)在制造過程中產(chǎn)生的廢水排放量較大，污染含量高，較難進行處理，對環(huán)境危害大。城市降水和受污染的地表水在城市污水中還沒有占到很大的比例，針對具體污水水質(zhì)選擇是否需要與其他污水混和稀釋后處理。

二微生物處理污水的機理及凈水方式

2.1微生物處理污水的機理

污水生物處理是除物理化學法外的另一類水處理方法，它利用微生物生命活動過程對污水中污染物進行轉(zhuǎn)移和轉(zhuǎn)化作用，使污水得帶凈化的處理方法。微生物處理污水的機理：利用微生物處理污水是以光合菌群和酵母菌群為主導，協(xié)同其它有益微生物共同作用，產(chǎn)生抗氧化物質(zhì)，通過氧化還原發(fā)酵等途徑分解氧化有機物，把有害有毒物質(zhì)轉(zhuǎn)化為無害無毒物質(zhì)。

2.2微生物凈化水質(zhì)的方式

微生物用于污水處理一般主要對污水有害化合物中的有機物質(zhì)起降解，轉(zhuǎn)化的作用。其凈水方式有:

1、降解作用:細菌、真菌和藻類都可以降解有機污染物。如好氧革蘭氏陰性桿菌和球菌可以降解石油烴、有機磷農(nóng)藥、甲草胺、氯苯等;霉菌可以降解石油烴、敵百蟲、撲草凈等;藻類可以降解多種酚類化合物。例如，1989年，美國阿拉斯加州最早大規(guī)模應用微生物降解油輪擱淺后泄漏的3.8t原油，在投入特殊的氮、磷營養(yǎng)鹽后，促進了當?shù)厥徒到饩纳L和繁殖，加速了油污的分解。

2、共代謝:微生物的共代謝是指微生物能夠分解有機物基質(zhì)，但是卻不能利用這種基質(zhì)作為能源和組成元素的現(xiàn)象。這類微生物有假單胞菌屬、不動桿菌屬、諾卡式菌屬、芽孢桿菌屬等。

3、去毒作用: 微生物通過轉(zhuǎn)化、降解、礦化、聚合等反應，改變污染物的分子結(jié)構(gòu)，從而降低或去除其毒性。如有機磷農(nóng)藥馬拉硫磷可以在微生物的水解作用下，被分解為含有一酸或二酸的物質(zhì)但是，微生物的作用是復雜的，有些微生物在凈化作用的同時，也有毒化作用。這類微生物可以使無毒物質(zhì)轉(zhuǎn)化為有毒物質(zhì)，從而產(chǎn)生新的污染。如三氯乙烯能夠在微生物作用下轉(zhuǎn)化為氯乙烯，這是強致癌物質(zhì)。

三微生物處理污水的方法

目前，污水的微生物處理主要有活性泥法，生物膜法，厭氧處理法，氧化塘法、固定化微生物技術(shù)處理污水等，其中最主要的和應用最廣泛的是固定化微生物技術(shù)處理污水。

3.1活性泥法

是一種應用最廣、工藝比較成熟的廢水生物處理技術(shù)。其處理裝置是由曝氣池和沉淀池兩個部分組成。曝氣池高度充氣，污水在其中和活性泥不斷混合，水中的有機質(zhì)被污泥吸附，部分被氧化分解，部分隨污泥進入沉淀池。沉淀污泥部分回流再生，部分為剩余污泥被排除。

3.2生物膜法

生物膜法是利用生物濾池處理污水，最初是從酒滴池開始的，并不斷得到改進，出現(xiàn)了塔式濾池，生物轉(zhuǎn)盤，浸沒法濾池等多種形式，其處理原理基本相同，都是依靠著生于固體介質(zhì)表面的微生物來凈化有機物的，因此，又稱生物過濾法。處理過程中的物質(zhì)轉(zhuǎn)移:空氣中的氧廢水生物膜此法比活性污泥法產(chǎn)生的剩余污泥少。

3.3厭氧處理法

厭氧處理法是在無氧條件下由兼性厭氧菌和專性厭氧菌來降解有機污染物的處理方法。通常用于不溶性有機物質(zhì)，如纖維素含量高的污水，或高濃度的工業(yè)廢水，也經(jīng)常用于處理剩余污泥。厭氧生物處理一般分為四個階段: 水解，發(fā)酵，產(chǎn)乙酸，產(chǎn)甲烷。這些無機物質(zhì)主要是大量的生物氣體即沼氣。沼氣的主要成分是CH4和CO2。

3.4氧化塘法

又稱生物塘法或穩(wěn)定塘法，是利用一個天然的或人工修整的池塘，由于污水在塘內(nèi)

停留的時間較長，通過水中的微生物代謝活動可以將有機物降解。在氧化塘中，廢水中的有機物主要是通過有機菌藻共生作用去除的。氧化塘中同時可以進行好氧和厭氧性分解作用和光合作用，三種作用互相影響[3]。

3.5固定化微生物技術(shù)

3.5.1固定化微生物技術(shù)的介紹

固定化微生物技術(shù)是將微生物固定在載體上使其高度密集并保持其生物功能，在適宜的條件下增殖并滿足應用之需的一種新的生物技術(shù)。這種技術(shù)應用于污水處理有利于提高生物反應器內(nèi)的微生物濃度，利于反應后的固液分離，縮短處理的時間。固定化微生物方法多種多樣，但主要有結(jié)合固定化，交聯(lián)固定化，包埋固定化和系指微生物吸附在載體表面而固定化的方法[4]。

交聯(lián)固定化是利用兩個或兩個以上的功能基團，使微生物菌體相互連接成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，即使功能基團直接與微生物細胞表面的反應基團如氨基、輕基等交聯(lián)，形成共價鍵而達到固定微生物的目的。由于形成共價建過程中，往往會對微生物細胞活性造成極大的影響，而且適用于此類固定化交聯(lián)劑大多昂貴，因此此法在應用上受一定的限制。包埋固定化方法是使微生物包埋在半透性的聚合物或膜內(nèi)，或使微生物細胞擴散進人多孔性的載體內(nèi)部，這種固定化方法具有操作簡單，能保持多酶系統(tǒng)，且對微生物細胞活性影響較少，是目前制備固定化微生物最常用、研究最廣的方法。固定化材料常有聚乙烯醇(PVA)，聚丙烯酞胺(ACAM)，聚乙烯乙二醇(PEG)、瓊脂、光硬化樹脂，海藻酸鈣、角叉萊膠等。除此之外，還有依靠微生物自身的絮凝作用而形成的固定化微生物，此法固定化需時長，受環(huán)境因子影響大。如升流式厭氧污泥床(UASB)反應器中顆粒污泥的形成即屬于微生物的自身固定化過程。

3.5.2固定化微生物技術(shù)的優(yōu)點

與普通懸浮生物處理法相比,固定化技術(shù)的優(yōu)點是:能在生物處理裝置內(nèi)維持高濃度的生物量,提高處理負荷、減少處理裝置容積;污泥產(chǎn)量少;可選擇性地固定優(yōu)勢菌種,提高難降解有機物的降解效率;抗毒物毒性強;對水質(zhì)及pH的變化有較好的穩(wěn)定性。這些優(yōu)點使固定化技術(shù)在廢水處理中受到重視,特別是在難降解和有毒廢水處理中表現(xiàn)出更大的潛力。國內(nèi)外學者對固定化技術(shù)在廢水處理中的應用進行了大量的研究。根據(jù)所固定微生物的種類的不同,固定化方法也有所不同。常用的方法主要有3種:載體結(jié)合法、包埋法和交聯(lián)法。其中載體結(jié)合法中的物理吸附法和包埋法是目前研究最廣泛的方法上述各種微生物處理技術(shù)，由于污水中的污染物質(zhì)是多種多樣的，在某些方面都存在一定的不足，所以一般一種污水的處理需要聯(lián)合使用幾種方法。四微生物技術(shù)處理污水的研究熱點和特點

4.1微生物處理污水的研究熱點

極端微生物是指那些在一般生物不能生存的條件下(如高酸、高堿、高溫、低溫、高壓、高鹽等)能生存的微生物。由于其特殊的生理機制，在環(huán)境保護中具有極大的應用價值。Sandra等的研究表明，嗜熱微生物可用來對高溫排放廢水直接處理，省去了冷卻的環(huán)節(jié)和花費，并且從動力學的角度講，提高溫度有利于提高反應速率從而加快廢水出來的速度，縮短水力滯留時間，減少動力消耗[5]。另有報道利用嗜堿細菌降解木質(zhì)素的研究[6]。極端微生物以其特殊的生理機制及其分泌的極端酶，正在成為研究熱點，隨著研究的深人將進一步推動極端微生物在污水處理中的應用。

4.2微生物技術(shù)處理污水的優(yōu)點

1、節(jié)約水資源，降低能耗和成本；

2、利用有益菌群原液比一般凈化槽處理污水，大大縮短曝氣時間，提高工效；

3、治污效果顯著，如有機氮、金屬離子、混濁度、COD(化學需氧量)、BOD(生化需氧量)等均下降至國標以下標準，而DO(溶解氧)上升，水質(zhì)得到改善；

4、處理污水中的重金屬等，消除毒害；

5、抑制病原菌，消除異味，改善空氣質(zhì)量；

6、可以清除糞尿惡臭，凈化生態(tài)環(huán)境，最大限度地減少畜禽的臭味，明顯地抑制了蚊蠅滋生。

利用微生物技術(shù)對環(huán)境治理尤其是對污水進行處理在國內(nèi)已得到廣泛使用，但由于所用的微生物是天然微生物，處理效果不好。通過輻射誘變和化學誘變方法篩選出對污水有極高凈化能力的高效微生物，是微生物處理方法的發(fā)展方向，在我國將有很大的發(fā)展前景。

五對微生物技術(shù)的展望

固定化微生物技術(shù)在廢水處理等領(lǐng)域顯示出了較大的優(yōu)異性,引起了人們普遍的關(guān)注并對其進行了廣泛的研究與應用。它的優(yōu)勢主要是:

（1）容積小,使處理負荷大幅提高；

（2）污泥產(chǎn)量低[7]；

（3）有利于優(yōu)勢菌種的固定,提高降解效率；

（4）物質(zhì)的承受能力強；

（5）穩(wěn)定性好。

同時我們也應該看到,要實現(xiàn)固定化微生物技術(shù)的工業(yè)化,還有許多問題需要進一步研究解決:

（1）固定化載體的成本及使用壽命是決定其經(jīng)濟可行性的關(guān)鍵因素,因此,開發(fā)適合于固定化微生物細胞的高效生化反應器和廉價固定化微生物載體,如何提高載體的使用壽命都有待解決[8]；

（2）固定化微生物細胞球在廢水處理過程中可能對某些懸浮物質(zhì)或高分子物質(zhì)處理效果欠佳,還可能出現(xiàn)發(fā)脹上浮或堵塞粘結(jié)等現(xiàn)象,所以需對廢水進行適當?shù)奈锢砘瘜W預處理,或與其他工藝組合使用,發(fā)揮各自的優(yōu)勢以達到最佳處理效果；

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關(guān)鍵詞：石油 微生物 勘探

一、引言

石油作為重要能源之一已被世界各國廣泛使用，由于在石油的開采、儲存、運輸、加工和石化產(chǎn)品生產(chǎn)等過程中的漏油以及突發(fā)性泄油事故致使大量的石油進入環(huán)境造成污染。石油污染的危害主要表現(xiàn)在列土壤生態(tài)系統(tǒng)的結(jié)掏和功能的破壞，嚴重影響土壤的透氣性和滲水性，導致土壤板結(jié)。肥力下降；在水體表面形成油膜，致使水中溶氧量急劇下降.造成水生生物的大量死亡，破壞水生生態(tài)環(huán)境和漁業(yè)資源；還可進入地下水系，直接污染地下水源，影響居民用水和農(nóng)田灌溉；石油中的一些致畸致癌物質(zhì)還可通過食物鏈的生物富集作用而直接危害人類健康。

地表勘探法，包括油氣微生物勘探技術(shù)在油氣勘探界一直不為人重視。近幾十年來，以“尋找構(gòu)造與圈閉為目標的地質(zhì)和地震方法占據(jù)了油氣勘探的主導市場?！比欢?0世紀70年代后，隨著各個大型含油氣盆地相繼進行不同程度的普查與勘探，油氣勘探形勢發(fā)生了新的變化，進入了一個困難時期。經(jīng)濟快速發(fā)展對油氣資源需求量猛增與油氣后備儲量不足之間的矛盾變得更加突出。

二、微生物勘探技術(shù)

為了提高勘探的準確性，在傳統(tǒng)勘探方法的基礎(chǔ)上，引入了微生物勘探石油的新技術(shù)，也叫油氣微生物勘探（MPOG），是一種依靠地表微生物進行油氣勘探的技術(shù)。人們發(fā)現(xiàn)油區(qū)底土中的重烴含量與季節(jié)變化有很大的聯(lián)系，而季節(jié)變化的起因與微生物活動密切相關(guān)。在底土中存在著能利用氣態(tài)烴為碳源的微生物，這些微生物在土壤中的含量和在底土中的烴濃度存在某種對應的關(guān)系，因此可用這些微生物作為勘探地下油氣田的指標菌。20世紀90年代，人們在微生物勘探領(lǐng)域做了大量研究，有著許多成功的案例。我國也在東北、華北地區(qū)的一些油田進行微生物勘探實踐。隨著微生物培養(yǎng)技術(shù)和測定方法的不斷改進，微生物勘探石油技術(shù)得到迅速發(fā)展，準確率不斷提高，在實踐中得到很好應用。目前它已成為石油勘探中一項重要的技術(shù)。

油氣微生物勘探技術(shù)的興起正好為克服這種窘境提供了廉價和有效的方法。著名的油氣地表勘探專家L.Horvitz1979年在美國第二屆非常規(guī)勘探方法討論會上曾說：“在油氣勘探發(fā)生困難時，所有行之有效的方法，無論是地質(zhì)方法、地球物理方法或地球化學方法都應采用，并應將這些方法睿智而有效地綜合成一套完整而有生命力的勘探體系?！?992年我國勘探地球物理學家陳滬生在討論發(fā)展直接找油氣物化談方法的戰(zhàn)略意義時指出：油氣勘查現(xiàn)在已處于以找圈閉為主，結(jié)合尋找地表物化探異常的階段，將來有可能發(fā)展到以尋找地表物化探異常，結(jié)合圈閉評價尋找油氣階段。許多國際石油公司包括Shell、Phillips等石油公司都紛紛支持油氣微生物勘探的研究，并將其應用到實際勘探中。

三、微生物勘探技術(shù)的應用

近10年油氣微生物勘探實踐說明，將地表微生物異常與地質(zhì)和地震資料相結(jié)合可以為油氣勘探者提供一套更加準確地預測地下油氣藏的新技術(shù)體系。在國外，油氣微生物勘探已經(jīng)成為一種獨立的勘探技術(shù)進入油氣勘探技術(shù)體系中。隨著微生物勘探實踐經(jīng)驗的積累、分析技術(shù)的完善，油氣微生物勘探可望在以下幾個方面取得突破：

1.可查明與構(gòu)造圈閉形態(tài)不一致的油氣分布；對那些宏觀受構(gòu)造控制，但儲集空間極不規(guī)則的油氣藏，可大大提高勘探成功率；

2.可發(fā)現(xiàn)更多的非構(gòu)造圈閉油氣藏，并使老油氣區(qū)出現(xiàn)新的勘探；

3.有可能從定性描述發(fā)展到定量計算，為估算資源量和儲量提供有效的依據(jù)和參數(shù)。同時，油氣微生物勘探技術(shù)正作為油藏表征的新工具從勘探領(lǐng)域延伸到開發(fā)領(lǐng)域。

J.Tucker和D.Hitzman研究了幾個實例后指出：詳細的微生物調(diào)查有助于改善油氣藏表征。在開采成熟區(qū)，采用緊密排列的采樣網(wǎng)絡(luò)來檢測微生物異常，并將微生物信息與地質(zhì)和地球物理資料結(jié)合起來，能對現(xiàn)有油區(qū)內(nèi)部署加密井和進行擴邊增儲提供合理的預測。這無疑增加了油氣微生物勘探的生命力和應用范圍。何愛翠；微生物降解法處理工業(yè)含油廢水的研究[D]；中南大學；2007年用微生物探勘的原理在于，當?shù)貧は沦Y源（如石油、天然氣或者特定礦物）在壓力和濃度的雙重驅(qū)動下，其成分（氣體或者礦物）持續(xù)地向地表作垂直擴散和運移，土壤中出現(xiàn)以其為養(yǎng)分的專性微生物，改變土壤微生物組成，這種異常的微生物聚集土壤往往可以作為對其下資源的佐證，因而通過微生物探測間接對其下資源進行探勘。其技術(shù)基礎(chǔ)是細菌對不同營養(yǎng)源異常高的適應性及廣泛分布。

目前在石油、天然氣部分金屬礦產(chǎn)勘查上該技術(shù)得到廣泛應用。 1991-1992年玻利維亞石油礦藏管理局和美國地質(zhì)微生物技術(shù)公司合作，在玻利維亞安第斯子區(qū)進行了為期兩年的地表微生物勘探和地球物理測量綜合研究，專門對近地表微生物的分布特征與地震探明構(gòu)造分布區(qū)之間的空間關(guān)系進行了研究。研究發(fā)現(xiàn)，在數(shù)個地震探明構(gòu)造上方，存在微生物高值異常。根據(jù)構(gòu)造的規(guī)模及其上方微生物異常強度，開拉斯科與卡塔里兩個構(gòu)造微生物異常最為明顯，后來在這兩個構(gòu)造中成功地鉆獲了油氣。開拉斯科構(gòu)造單井產(chǎn)凝析油量約為110t/d，天然氣產(chǎn)量約為1.77×104m3/d；卡塔里構(gòu)造單井產(chǎn)油量約為76t/d，天然氣產(chǎn)量約為1.67×104m3/d。

美國加州梅斯基特金礦區(qū)，利用土壤有的蠟狀芽孢桿菌尋找金礦已獲得成功。蠟狀芽孢桿菌孢子密度的增大與已知隱伏浸染型金礦的位量相對應，根據(jù)壤中金的含量圈出了地表和深部礦體。

篇9

關(guān)鍵詞 普洱茶；發(fā)酵；微生物

中圖分類號 S571.1 文獻標識碼 A 文章編號 1007-5739（2016）21-0253-03

普洱茶是以云南大葉種曬青毛茶為原料經(jīng)后l酵加工而成緊壓茶或散茶，普洱茶又按照其加工工藝將其分為普洱生茶和普洱熟茶。普洱熟茶是曬青毛茶經(jīng)潮水、渥堆，經(jīng)渥堆過程中物質(zhì)變化是由微生物、酶、濕熱、氧化等綜合作用的結(jié)果，因其經(jīng)過人工后發(fā)酵以區(qū)別于普洱生茶。

近年來，隨著對普洱茶的深入研究，證實了普洱茶具有抗氧化、抗腫瘤、降血脂和降血糖等功效[1-4]。曬青毛茶不經(jīng)過微生物的發(fā)酵難以形成普洱熟茶所特有的香氣和湯色，一般認為微生物或微生物酶的濕熱作用對普洱茶品質(zhì)的形成起著決定性作用[5-7]。

1 普洱茶加工方式與微生物

普洱茶鮮葉采摘經(jīng)萎凋后，進行殺青，再揉捻，后曬干制得曬青毛茶。再由曬青毛茶加工得到普洱茶，其具體制作工藝流程如圖1所示。

將曬青毛茶經(jīng)人工增濕渥堆快速發(fā)酵而制成普洱熟茶[8]。普洱熟茶的加工方式借鑒于安化黑茶，但又不同于安化黑茶。其主要的不同在于普洱茶經(jīng)過曬青毛茶這一步，而安化黑茶從揉捻到后發(fā)酵不經(jīng)過干燥過程，再焙火干燥[9]。

普洱茶與紅茶的發(fā)酵方式相比，普洱茶的發(fā)酵與紅茶有些相似，都有茶多酚經(jīng)氧化生成茶紅素和茶褐素的過程，不同之處在于紅茶發(fā)酵僅需要3～4 h，而普洱茶發(fā)酵所需時間較長，渥堆時間至少需要3～4周。因為紅茶發(fā)酵時間短，所以微生物作用較少，主要是生物酶的作用，而普洱茶的發(fā)酵與微生物的作用是分不開的。

普洱原料曬青毛茶就有大量的內(nèi)生菌，曬青毛茶又長期暴露在空氣中，在研究中發(fā)現(xiàn)很多發(fā)酵過程中的微生物都在普洱茶鮮葉中[10]和茶園空氣中[11-12]都有發(fā)現(xiàn)。普洱茶渥堆時，剛開始溫度由室溫緩慢升高，其潮水量常達到40%左右，堆溫一般保持在28～55 ℃，非常適合微生物的生長。在發(fā)酵過程中，肉眼可見真菌菌絲。一般認為，普洱茶的加工過程離不開微生物的作用，普洱茶的品質(zhì)與微生物的消亡有密切關(guān)系。

2 參與普洱茶發(fā)酵過程的微生物研究方法

2.1 微生物的傳統(tǒng)分離鑒定

研究微生物學的傳統(tǒng)方法是將茶葉與無菌水按一定比例進行均質(zhì)，然再做梯度培養(yǎng)，以此來初步了解渥堆發(fā)酵中普洱茶中微生物數(shù)量，然后對分離得到的微生物進行純培養(yǎng)，以更好地進行菌種鑒定或保藏。鑒定方法主要為形態(tài)學鑒定或根據(jù)生理生化性狀，一般將結(jié)果與標準分類系統(tǒng)中微生物形態(tài)或生理生化性狀進行對比[13]。該方法是研究微生物的主要方法，已成功證實普洱茶中確實存在細菌、酵母、霉菌和放線菌[14-28]。

2.2 微生物自動鑒定系統(tǒng)

鑒于微生物傳統(tǒng)鑒定方法的缺陷如工作量大，不利于操作，還受限于鑒定者的專業(yè)知識和認知能力。傳統(tǒng)鑒定方法還常常受培養(yǎng)條件的限制，很多微生物不能在培養(yǎng)基上被分離培養(yǎng)出來，造成了鑒定種群不夠完整，使得人們無法全面了解普洱茶發(fā)酵過程中的微生物種群情況，多數(shù)只是鑒定到了優(yōu)勢菌種或是在一定的培養(yǎng)條件下表現(xiàn)為優(yōu)勢的菌群。

近年來微生物快速鑒定儀更多地應用到微生物鑒定工作來，該系統(tǒng)是將微生物與底物反應的生化類型與已知建立的數(shù)據(jù)庫中的類型比較，使微生物鑒定更加快速、準確。Mo等[20]利用API ID 32C和API ID 50 CHL微生物快速鑒定系統(tǒng)對普洱茶發(fā)酵過程中的微生物進行鑒定，發(fā)現(xiàn)了多種酵母和細菌。但由于該系統(tǒng)是根據(jù)現(xiàn)有數(shù)據(jù)庫中所提供的背景資料進行微生物鑒定，數(shù)據(jù)庫資料會影響微生物鑒定的種類及準確性。

2.3 分子生物學方法

PACE N R的研究表明，傳統(tǒng)分離方法鑒定的微生物只占環(huán)境微生物總數(shù)的0.1%～10.0%[29]，傳統(tǒng)鑒定方法還常常受培養(yǎng)條件的限制，很多微生物不能在培養(yǎng)基上被分離培養(yǎng)出來，造成了鑒定種群不夠完整，使得人們無法全面了解普洱茶發(fā)酵過程中的種群情況，多數(shù)只是鑒定到了優(yōu)勢菌種或是在特定的培養(yǎng)中為優(yōu)勢的菌群。日本學者M.Abe等[30]應用PCR變性梯度凝膠電泳（PCR-DGGE）技術(shù)研究普洱茶發(fā)酵過程中微生物群落結(jié)構(gòu)，對不同發(fā)酵階段的普洱茶中微生物種群進行了研究，發(fā)現(xiàn)普洱茶2種優(yōu)勢種群，同時在用孟加拉紅培養(yǎng)基，PDA 培養(yǎng)基在 30 ℃ 培養(yǎng)時也證實了這一結(jié)論，進一步說明了將分子生物學方法用于普洱茶發(fā)酵過程中微生物學研究是可行的[30]。

劑量組也對普洱茶鮮葉中的內(nèi)生菌[10]進行了研究，普洱茶渥堆發(fā)酵微生物的研究以及普洱茶區(qū)空氣微生物[11-12]的研究中都分別采用了PCR，Polymerase Chain Reaction（聚合酶鏈式反應）分子生物學的方法，擴增細菌的16SrDNA和真菌的ITS序列測定分析或 PCR-變性梯度凝膠電泳（PCR-DGGE）對參與或有可能參與普洱渥堆發(fā)酵的微生物進行了鑒定。

呂昌勇[31]利用宏基因組學高通量測序研究方法認為，細菌是普洱茶渥堆發(fā)酵過程中的主要菌群，占總微生物的76.26%；真核生物次之，占16.35%。目前應用高通量測序在普洱茶渥堆發(fā)酵微生物的研究中很少涉及，趙 明等[32]在利用高通量測序方法研究普洱茶發(fā)酵過程中的微生物，對參與普洱茶渥堆發(fā)酵微生物種群作了初步的鑒定。Wei Zhang等[33]通過實時定量PCR研究認為，煙曲霉、微小根毛霉、熱帶假絲酵母菌、鐮刀菌、Thermomyces lanuginosus、Aspergillus niger、blastobotrys adeninivorans、Rasamsonia emersonii、Asper-gillus tubingensis、Rasamsonia cylindrospora、Rasamsonia byss-ochlamydoides等嗜熱菌在普洱茶渥堆發(fā)酵過程中起著重要的作用。

3 普洱茶發(fā)酵微生物研究進展

3.1 普洱茶微生物種群

陳宗道等[14]從20世紀80年代開始研究普洱茶中的微生物以來，已經(jīng)證實細菌、酵母、霉菌和放線菌都參與了普洱茶的發(fā)酵。

周紅杰和趙龍飛等[6，18]先后從普洱茶和普洱茶翻堆樣品都分離得到了黑曲霉、酵母菌、米曲霉、根霉、灰綠曲霉和極少的細菌。方 祥等[23]，M.Abe等[30]以及楊瑞娟等[34-35]從不同年代的普洱茶和渥堆發(fā)酵的普洱茶中分離得到了霉菌（黑曲霉、微小根毛霉、牛根毛霉）、酵母、細菌（芽孢U菌，Bacillus coagulans，球菌，無芽孢短桿菌，乳酸菌，植物乳桿菌，類乳酸片球菌和大量嗜熱細菌）、放線菌。呂昌勇[31]認為，普洱茶發(fā)酵初期的優(yōu)勢細菌是變形菌門（Proteobac-teria），隨后厚壁菌門（Firmicutes）上升成為優(yōu)勢菌，放線菌門（Acti-nobacteria）與Firmicutes在發(fā)酵后期繁成為共同優(yōu)勢菌。原料的優(yōu)勢真菌歸類為no-rank-Fungi（65.39%），發(fā)酵過程中，曲霉屬（Aspe-rgillus.sp）真菌一直處于優(yōu)勢；發(fā)酵中期環(huán)境中的根毛霉屬（Rhizomucor.sp）先升高后降低。

3.2 優(yōu)勢菌種與普洱茶品質(zhì)的關(guān)系

近年來，關(guān)于普洱茶與微生物關(guān)系研究更多地集中在優(yōu)勢菌種對普洱茶品質(zhì)影響的研究，多數(shù)是將分離純化后的微生物再接種到普洱茶中，用來研究普洱茶品質(zhì)改變情況。陳秀燕等[36]將灰綠曲霉和青霉接種到普洱生餅茶和散茶中，能明顯加速普洱茶陳化的作用，且能提高茶湯的香氣。研究表明，灰綠曲霉和青霉接能加速茶葉中纖維和果膠的降解，使普洱茶更加甘滑、醇厚。董文明等[27]認為，普洱茶發(fā)酵過程中，黑曲霉產(chǎn)淀粉酶、纖維素酶、蛋白酶、果膠酶，酵母菌產(chǎn)淀粉酶、蛋白酶、果膠酶，細菌只產(chǎn)淀粉酶、蛋白酶。經(jīng)過這些酶的作用后普洱生茶形成了普洱熟茶甘厚濃醇的品質(zhì)特征。周才碧等[28]利用優(yōu)勢菌株黑曲霉純種對普洱茶進行發(fā)酵試驗，得到的茶樣香氣濃純、湯色呈黑褐色、滋味較平和，且茶色素發(fā)生明顯變化，表明黑曲霉可以作為發(fā)酵用菌種，適于普洱茶的渥堆發(fā)酵。康燕山等[37]對普洱茶在普洱茶發(fā)酵過程中添加外源酶和接種酵母，其結(jié)果表明，使用外源酶可增加普洱茶所含水溶性總糖及游離氨基酸的含量，接種酵母可明顯加速普洱茶茶多酚的轉(zhuǎn)化。

4 普洱茶發(fā)酵過程中微生物學研究存在的不足及展望

4.1 存在的不足

目前對參與普洱茶發(fā)酵微生物的研究都集中在優(yōu)勢菌和能培養(yǎng)的微生物上，對于非培養(yǎng)微生物研究仍然很少涉及，對于這些微生物在普洱茶渥堆發(fā)酵中的作用研究就更無從談起。對于普洱茶發(fā)酵微生物對普洱茶品質(zhì)的轉(zhuǎn)化作用及其機制研究首先就要解決非培養(yǎng)的微生物鑒定工作。目前關(guān)于普洱茶中微生物發(fā)酵的研究已經(jīng)日趨成熟，宏基因組學[38]也更多地應用于普洱茶發(fā)酵微生物研究中來，多數(shù)都是停留在第一代測序研究上。關(guān)于微生物對普洱茶品質(zhì)的影響，更多的是在于研究接種某一種或多種優(yōu)勢微生物或酶對發(fā)酵品質(zhì)的影響，而忽略了普洱茶發(fā)酵微生物群落對普洱茶發(fā)酵的影響。

4.2 展望

微生物第二代測序技術(shù)在環(huán)境微生物的研究方面已經(jīng)非常成熟，已經(jīng)廣泛應用于環(huán)境微生物的研究[39-40]，而對普洱茶發(fā)酵中的微生物的研究結(jié)果卻少之又少。呂昌勇[31]和趙 明等[32]利用高通量測序方法對普洱茶渥堆發(fā)酵中的微生物進行了研究，這一技術(shù)的應用為普洱茶中非培養(yǎng)微生物的研究提供了新的可能。高通量測序技術(shù)在環(huán)境微生物的研究中常比PCR-DGGE法檢測靈敏度高 3.8～39.4倍[41]。

利用高通量測序技術(shù)將普洱茶從鮮葉到普洱熟茶成品的微生物組成作出系統(tǒng)研究，并總結(jié)出這些微生物生長和消亡規(guī)律，對普洱茶鮮葉、干茶、渥堆的每個時期和成品的微生物生態(tài)系統(tǒng)作出系統(tǒng)的研究，探明這些微生物在每個時期的組成情況如何，以使人們能更好地探明普洱茶在發(fā)酵中是否有有害微生物的參與，為明確這些微生物在發(fā)酵過程的作用提供更為全面而系統(tǒng)的研究對象，從而有利于更好地了解普洱茶發(fā)酵中微生物的消亡規(guī)律和其對普洱茶品質(zhì)的影響。

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篇10

關(guān)鍵詞：污水處理、微生物、修復技術(shù)

中圖分類號：TU992文獻標識碼： A

一、前言

隨著人類農(nóng)業(yè)工業(yè)活動的加強大量施用化肥、農(nóng)藥以及工業(yè)廢棄物的排放，使得許多有毒有害的有機化學污染物進入土壤系統(tǒng)，同時對地下水及地表水造成二次污染。清除環(huán)境污染物的傳統(tǒng)方法有物理修復法和化學修復法，但是這些方法存在著處理費用高、操作復雜、而且有二次污染的可能性等缺點。

微生物修復技術(shù)是近年來新興的一門環(huán)境生物技術(shù)，實驗結(jié)果表明生物修復技術(shù)是有效的可行的。目前生物修復技術(shù)在清除或減少土壤地表水地下水和廢水中的化學物質(zhì)方面的應用已獲得成功。本文介紹了利用微生物對污水進行修復的主要技術(shù)。

二、微生物修復原理

微生物修復的基本原理是利用自然界中微生物對污染物的生物代謝作用。實際上，大多數(shù)環(huán)境中都存在著天然微生物降解凈化有毒有害有機物質(zhì)的過程，只是自然條件下的微生物凈化速度很緩慢，因此，能夠被廣泛應用到環(huán)境保護實踐中的微生物修復，都是在人為促進條件下進行的，如通過提供氧氣，添加氮磷營養(yǎng)鹽，接種經(jīng)過馴化培養(yǎng)的高效微生物等來強化這一過程，迅速去除污染物質(zhì)，這就是微生物修復的基本思想。

與化學、物理相比，生物修復技術(shù)具有下列優(yōu)點：

(1)原位修復可使污染物在原地被降解清除；

(2)修復時間較短；

(3)操作簡便，對周圍環(huán)境干擾較?。?/p>

(4)設(shè)施簡單，運行經(jīng)費少；

(5)操作者與污染物直接接觸機會減少，不致對人產(chǎn)生危害；

(6)不產(chǎn)生二次污染。

當然微生物修復技術(shù)并不是十全十美，它也存在不足：

(1)條件苛刻，微生物修復是一種科技含量較高的處理方法，其運作必須符合污染場地的特殊條件，微生物修復易受環(huán)境條件變化的影響：酸堿度、溫度以及其他因素等都會影響微生物修復的進程；

(2)由于微生物的專一性，導致對水體修復的宏觀效果不佳；

(3)需要對污染環(huán)境進行詳細和周密的調(diào)查研究，前期工作時問較長，花費高；(4)微生物對污染物的降解存在一極限濃度；

(5)修復過程中可能產(chǎn)生有毒物質(zhì)。

三、微生物修復的影響因素

微生物修復的成功運行，主要是在適宜的環(huán)境條件下，微生物對污染物的降解過程能夠發(fā)生。

3.1營養(yǎng)

微生物的生長需要保持碳、氮、磷營養(yǎng)物質(zhì)及某些微量營養(yǎng)元素在一定濃度，在生物修復過程中經(jīng)常會出現(xiàn)缺乏氮、磷菩營養(yǎng)時降解速度變慢的情形。

3.2溶解氧濃度

大多數(shù)微生物在降解污染物時需耗氧，因此污染物濃度高時，水體或土壤中的溶解氧往往消耗殆盡，造成污染場所食物鏈中斷，污染物質(zhì)的降解也隨之終止，因此溶解氧水平也是生物修復中的重大影響因素之一。

3.3 pH值

微生物對環(huán)境pH值非常敏感，pH值的變化會對微生物降解污染韌的速率和活性產(chǎn)生很大影響。接近中性pH對于大多數(shù)微生物都是合適的，一般不需要進行調(diào)節(jié)，只有在特定地區(qū)才需要對環(huán)境的pH進行調(diào)節(jié)。

3.4溫度

微生物可生長的溫度范圍較廣，一般而言，微生物生長的最佳溫度為25℃～30℃。通常隨著溫度的下降，生物的活性也降低，接近零度時活動基本停止。

四、微生物修復技術(shù)在污水處理中的應用

4.1加入微生物和微生物制劑法

投放微生物和微生物制劑法，即針對不同的水體，向其投加針對該污染環(huán)境而事先培養(yǎng)好的微生物或外源微生物制劑，并為之創(chuàng)造良好的生長條件，形成優(yōu)勢菌種，最終做到對污染水體的修復。利用投加微生物和微生物制劑比土著微生物對污染的自然凈化的速度快。同時具有針對性，可以對不同程度的水污染能夠進行不同程度的凈化。

4.2吸附技術(shù)

生物吸附法作為一種新興的廢水處理技術(shù)，在處理低濃度重金屬污染廢水方面有著極為廣闊的應用前景。從運用情況看，利用微生物吸附廢水中的重金屬在投資、運行、操作管理和金屬回收、回用等方面優(yōu)越于傳統(tǒng)的治理方法。與其他技術(shù)相比，生物吸附技術(shù)有得天獨厚的優(yōu)點，差別在于運行過程中微生物能不斷地增殖，且去除金屬離子的量隨生物量增加而增加。而離子交換法中離子交換樹脂的交換容量有限，達到飽和吸附后，就不能再去除金屬離子；化學沉淀法中，作用物的化學計量也是一定的，無增殖的可能。因此，開發(fā)和利用生物吸附處理重金屬廢水，使廢水處理的技術(shù)向著無毒、無害、無二次污染的方向邁進了一大步。

4.3固定化技術(shù)

生物催化劑固定化技術(shù)發(fā)展到今天，已形成了較為完備的理論與方法。隨著環(huán)境生物學的發(fā)展，固定化在治理污水中越來越受到青睞。固定化技術(shù)使生物催化劑具有與其在游離狀態(tài)下完全不同的優(yōu)點，例如，與產(chǎn)物分離方便；生物催化劑可回收或循環(huán)使用；生物催化劑穩(wěn)定性大大提高；反應過程可得到嚴格控制等。這些特點使價格昂貴的生物催化劑的應用成本大大降低，從而使其在大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)中得到應用成為可能。

4.4培養(yǎng)微生物技術(shù)

培養(yǎng)微生物技術(shù)是一種污染水體的微生物修復技術(shù)。它通過向水體中投加營養(yǎng)物質(zhì)、無毒表面活性劑、電子受體或共代謝基質(zhì)等物質(zhì)來強化水環(huán)境中本身具有降解污染物能力的微生物的生存環(huán)境，從而達到激活土著微生物，使土著微生物對污染物的降解能力充分發(fā)揮，從而達到水體修復的目的。

4.5投加微生物絮凝劑技術(shù)

微生物絮凝劑主要是在菌細胞外分泌的，它是一種具有絮凝功能且能被自然降解的高分子有機物，如糖蛋白、纖維素和DNA等，有些直接利用微生物細胞，如某些大量存在于土壤、活性污泥和沉積物中的細菌、霉菌、放線菌和酵母菌等，本身即可用作絮凝劑。微生物絮凝劑具有高效、無毒和易于生物降解的特點。

五、微生物修復的發(fā)展趨勢

污染水體的修復是一個牽涉到污染治理、環(huán)境生態(tài)和水利水文等多學科的系統(tǒng)工程，治理水體污染必須從水體的功能定位、污染整治的日標和水體生態(tài)系統(tǒng)平衡的建立等多方面入手。微生物修復與物理修復、化學修復相比雖然有眾多突出的優(yōu)點，但只有與物理修復、化學修復等方法相結(jié)合，組成統(tǒng)一的修復技術(shù)體系，微生物修復才能在治理水體污染方面發(fā)揮出最大的作用。

因此，微生物修復技術(shù)今后的研究趨勢是：(1)微生物修復與物理化學修復相結(jié)合的組合技術(shù)；(2)原位和異位相結(jié)合的生物修復組合技術(shù)；(3)采用現(xiàn)代分子生物學技術(shù)研究生物修復的機理以及分離培養(yǎng)高效降解菌和構(gòu)建基因工程菌以提高微生物降解污染物的效率等。

參考文獻：