導(dǎo)語：如何才能寫好一篇簡單的美麗，這就需要搜集整理更多的資料和文獻，歡迎閱讀由公務(wù)員之家整理的十篇范文，供你借鑒。

篇1

梓琳展現(xiàn)給人們的不只是美麗容顏，還有她的聰慧和真實之美。她說，每個女孩子都有自己的閃光之處，無論從事什么職業(yè)，無論容顏什么樣。內(nèi)心定要自信。

Q：平時的工作那么繁忙，經(jīng)常日夜顛倒吧?你是如何保持肌膚年輕狀態(tài)的呢，讓自己始終光彩奕奕?

A：我比較注重基礎(chǔ)保養(yǎng)。每天晚上清潔肌膚的工作要認真完成，才能讓肌膚有很好的狀態(tài)來吸收保養(yǎng)品。我還比較重視保濕的工作，我覺得保濕是肌膚維持年輕狀態(tài)的必要條件。另外，每日的頭發(fā)護理也是不可或缺的一步。

Q：你會怎樣挑選護膚品，以什么作為標準?

A：我會選擇適合自己膚質(zhì)的護膚品，以“不敏感、無負擔”為標準。最喜歡怎樣的妝容?如果只有3分鐘時間化妝，你覺得必不可少的是什么?

A：我習慣根據(jù)場合選擇妝容。三分鐘可以畫一個最簡單的妝容，我覺得必不可少的就是：粉底、腮紅、唇膏和睫毛膏。

Q　說說你的生活方式吧?比如飲食，運動等。

我喜歡清淡的飲食，也喜歡適當?shù)爻孕┕蕘泶媪闶?。平時也會保持運動的習慣，痛快地讓身體出汗，出汗過后皮膚就會變得很好。

Q　我們都知道你得獎之后，幾乎是在全世界范圍內(nèi)參加慈善活動，有些什么特別的經(jīng)歷和感想跟我們讀者分享嗎?

A：每一任的世界小姐都要在全球范圍內(nèi)參與各類慈善活動，當然我也不例外。以前我認為參與慈善活動是遙不可及的，但是我慢慢發(fā)現(xiàn)這些有時候只是舉手之勞，其實世界真正需要的不是“一個人做很多”，而是“每個人奉獻一點點”。雖然我已經(jīng)卸任了，但是接下來我還是會積極參與慈善活動。

篇2

[關(guān)鍵詞] 中性粒細胞彈性蛋白酶；α1-抗胰蛋白酶；慢性阻塞性肺疾病

吸煙能導(dǎo)致全身多種疾病，其中有24%的吸煙者能發(fā)生慢性阻塞性肺疾?。–OPD）。由于大多數(shù)COPD患者早期沒有癥狀，所以不能及早就診，這些患者只能做肺功能檢查才能確診。對于沒有肺功能儀的醫(yī)院和不適宜做肺功能檢查的患者是否可以通過血清酶學檢測達到早期診斷的目的呢？我們的研究發(fā)現(xiàn)中性粒細胞彈性蛋白酶（NE）和α1-抗胰蛋白酶（α1-AT）的血清含量在吸煙的COPD患者組、非患者組及健康組有明顯不同，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

選擇2008年10月～2010年1月在我院體檢者和呼吸科住院的COPD患者共86例。將其分成三組：A組33例是有吸煙史的住院治療后處于穩(wěn)定期的COPD患者；B組33例是有吸煙史但是沒有COPD的健康體檢者；C組20例是不吸煙的健康體檢者。三組受檢者的年齡和性別匹配，具有可比性。吸煙者吸煙指數(shù)均≥30包年，均進行吸入支氣管擴張劑后的肺功能檢查：B組一秒率>70%，排除COPD診斷，A組一秒率

1.2 方法

采集空腹靜脈血5 mL，A組出院前采血，B組和C組在體檢時留取血樣，及時提取血清，每例取1 mL血清分裝在2個待測管中，待測血清存于-70℃超低溫冰箱保存。使用美國進口的原裝試劑盒，用ELISA法檢測血清中NE和α1-AT含量，具體步驟根據(jù)試劑盒操作說明書逐步進行。每組研究對象檢測NE和α1-AT兩種酶含量，然后比較每一種酶含量在兩組間的差別有無顯著性。

1.3 統(tǒng)計學處理

應(yīng)用SPSS 18.0軟件對數(shù)據(jù)結(jié)果進行統(tǒng)計學分析。六組數(shù)據(jù)有五組為非正態(tài)分布，所以各組數(shù)據(jù)取中位數(shù)進行組間秩和檢驗，P < 0.05為有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

見表1。NE血清含量以吸煙的COPD患者組最高，中位數(shù)為55.21 ng/mL，吸煙的非COPD患者組其次，中位數(shù)為25.76 ng/mL，兩組比較差異有統(tǒng)計學意義（P < 0.01），吸煙的COPD患者組及吸煙的非COPD患者組均明顯高于非吸煙的健康對照組（中位數(shù)為3.12 ng/mL）（P均< 0.01）。α1-AT血清含量以吸煙的非COPD患者組最高，中位數(shù)為627.72 ng/mL，吸煙的COPD患者組其次，中位數(shù)為421.08 ng/mL，吸煙的非COPD患者組和吸煙的COPD患者組均明顯高于非吸煙的健康對照組（中位數(shù)為9.75 ng/mL），但是吸煙的兩組比較差異無統(tǒng)計學意義（P > 0.05）。

3 討論

我國流行病學調(diào)查資料顯示40歲以上成年人COPD患病率為8.2%。吸煙是COPD發(fā)病的主要環(huán)境因素，在國外約占90%以上，我國為71.6%。吸煙導(dǎo)致COPD的重要

損害機制是酶失衡，即NE升高，同時α1-AT減少。NE是重要的彈性蛋白酶之一，主要來自肺內(nèi)的中性粒細胞和肺泡巨噬細胞。吸煙者由于煙霧及有害氣體的作用，使肺泡巨噬細胞和肺內(nèi)中性粒細胞聚集、活化，釋出NE。NE能夠降解構(gòu)成肺泡壁的細胞外基質(zhì)和上皮連接結(jié)構(gòu)，造成肺泡間隔破壞，肺泡腔擴大，小氣道在呼氣時失去了周圍組織支持而陷閉，導(dǎo)致COPD發(fā)生。NE能導(dǎo)致氣道黏液高分泌，增強病原菌與氣道上皮的黏附力，而且NE還能降解免疫球蛋白、補體，降低機體對病原菌的清除，因此導(dǎo)致感染發(fā)生或不易控制。NE能激活中性粒細胞釋放更多的NE，形成NE的惡性循環(huán)[1]。本研究顯示：血清中NE含量的中位數(shù)在吸煙的COPD穩(wěn)定期患者組和吸煙的非患者組均明顯高于健康對照組，且患者組明顯高于非患者組，這一結(jié)果說明，只要是吸煙者無論是否患COPD，都始終存在下呼吸道慢性炎癥，只是吸煙的患者組氣道炎癥程度更重，非患者組炎癥程度較輕。提示：測定血清NE含量對吸煙者是否患有COPD有早期預(yù)測診斷價值。

α1-AT是一種糖蛋白，主要由肝細胞合成，分泌入血后作用于肺臟。α1-AT也能產(chǎn)生于肺局部巨噬細胞和支氣管上皮細胞，這些肝外合成的α1-AT在肺局部組織損傷的調(diào)節(jié)中起重要作用。α1-AT是活性最強的蛋白酶抑制劑，占NE抑制作用的92%，α1-AT可與NE 1∶1結(jié)合，使NE失活，拮抗NE對彈性蛋白的水解作用，體內(nèi)NE增加時，α1-AT的產(chǎn)生也會相應(yīng)增加。先天性的α1-AT缺乏（AATD）是一種遺傳性疾病，發(fā)生COPD的風險顯著增加，主要見于歐美國家的白種人，在東亞人群中較為少見。AATD的不吸煙者，呼吸困難發(fā)生在44～51歲，吸煙者呼吸困難發(fā)生在32～35歲，而且AATD的吸煙者中，僅30%女性、18%男性生存到55歲[2]。后天的α1-AT缺乏不是絕對值下降，而是相對不足。本研究發(fā)現(xiàn)，吸煙伴COPD穩(wěn)定期患者α1-AT的含量高于健康對照組，與國內(nèi)多個研究結(jié)果一致[3]，但低于吸煙的非患者組，即α1-AT的含量：非患者組>患者組>對照組，而對應(yīng)的NE含量是患者組>非患者組>對照組。這一研究結(jié)果提示：①α1-AT的含量在患者組沒有與NE平行增高，出現(xiàn)了相對缺乏。分析原因是α1-AT產(chǎn)生不足，破壞增多。正常人呼吸道中的α1-AT的含量遠遠大于NE的含量，所以肺組織不易遭到NE的破壞，但是α1-AT極易被氧化，吸煙時產(chǎn)生的煙霧中的自由基有很強的氧化作用，從而破壞肺組織中的α1-AT，因此，煙齡越長、吸煙量越大的老年人COPD發(fā)病率越高。②α1-AT的含量在非患者組高于患者組，由于非患者組的個體具有很強的產(chǎn)生α1-AT的能力，使非患者組的NE和α1-AT兩種酶處于高水平的平衡，一旦平衡被打破，將導(dǎo)致COPD的發(fā)生。這也提示我們，在COPD的防治過程中可考慮應(yīng)用促使肝細胞產(chǎn)生α1-AT的藥物或補充α1-AT制劑。

總之，NE在吸煙的COPD患者中明顯高于吸煙的非COPD患者，而α1-AT卻沒有出現(xiàn)相應(yīng)的變化，因此，對吸煙者是否發(fā)生了COPD的早期診斷除了查肺功能以外，測定血清中NE含量有一定的意義，具體的參考值范圍有待進一步研究。

[參考文獻]

[1] 趙華，趙瑾. 蛋白酶/抗蛋白酶系統(tǒng)與慢性阻塞性肺疾病[J]. 臨床肺科雜志，2010，15（8）：1149-1151.

[2] 田和平，徐金枝. α1-抗胰蛋白酶缺乏與疾病關(guān)系的研究進展[J]. 中華醫(yī)學雜志，2006，30（5）：439-440.

篇3

[關(guān)鍵詞]單一煤種；數(shù)學模型；質(zhì)量控制

中圖分類號：G633.6 文獻標識碼：A 文章編號：1009-914X（2016）25-0232-02

1 序言

煤炭是數(shù)以噸計的大宗商品，其檢驗項目很多，其中發(fā)熱量是最重要的一項指標。它關(guān)系到鍋爐熱效率、燃燒熱平衡及發(fā)電標準煤耗的計算，并且在煤炭貿(mào)易中，發(fā)熱量也是重要的煤質(zhì)驗收指標和計價指標。因此，煤質(zhì)發(fā)熱量檢驗的準確性至關(guān)重要。對于以汽車煤為主的電廠，入廠煤化驗人員相對工作量比較大，要在當天完成所有煤種的化驗、計算、審核、上報、數(shù)據(jù)錄入等工作，時間緊任務(wù)大，容易在長期疲憊情況下出現(xiàn)工作失誤。為此利用Qb，ad與Mad、Aad、Vad之間的密切關(guān)系，應(yīng)用統(tǒng)計學中的多元線性方程，對其建立數(shù)學模型，作為單一品種煤質(zhì)的質(zhì)量控制審核校驗的重要工具。

2 采用相關(guān)數(shù)據(jù)進行分析

2.1 數(shù)據(jù)采集情況

根據(jù)懷安電廠近些年來煤種采購工作可知，每月來煤約十萬噸，近40多個礦點，煤種較多；有時出現(xiàn)三十多戶煤，每戶每月的來煤情況大體穩(wěn)定，因此選用某一礦點的煤種做數(shù)據(jù)分析，有實際指導(dǎo)意義。下面選取某一礦點的煤質(zhì)檢驗數(shù)據(jù)進行分析。

2.2 數(shù)據(jù)相關(guān)性分析

多元線性回歸的計算需要用到線性代數(shù)中矩陣的計算，計算難度及計算量比較大，應(yīng)用excel或者應(yīng)用統(tǒng)計學中的eviews軟件分析，完成計算就非常容易。

首先需要對 對該單一煤種的發(fā)熱量與空干基水分、灰分、揮發(fā)分之間的關(guān)系做相關(guān)性分析如表2所示。

通過查相關(guān)系數(shù)r檢驗表可知，當自由度（n-m-1）=100-3-1=96，α=0.05時，r=0.19460。根據(jù)表2中數(shù)據(jù)可知，三個相關(guān)系數(shù)-0. 90229、 -0. 562796的絕對值均大于 0.19460，所以彈筒發(fā)熱量與空干基水分、揮發(fā)分均具有相關(guān)性；與空干基水分弱相關(guān)。

3 建立回歸方程

在統(tǒng)計中研究一個因變量與兩個或兩個以上自變量之間的相互關(guān)系的理論和方法稱為多元線性回歸。多元線性回歸的一般方程式為：

= b0+b1X1+b2X2+……+ bkXk

該數(shù)學模型即利用彈筒發(fā)熱量Qb，ad與空干基水分Mad、空干基灰分、空干基揮發(fā)分Vad之間的關(guān)系，建立熟數(shù)學模型。

3.1 單一煤種回歸方程的建立

由表3中的回歸分析可以得出該煤種的回歸方程為：

Qb，ad=31.8402-0.3257Mad-0.3522Aad-0.0312Vad

Qb，ad：空干基彈筒發(fā)熱量

Mad：空干基水分

Aad：空干基灰分

Vad：空干基揮發(fā)分

3.2 判定系數(shù)的確定

SSR：回歸平方和

SSE：殘差平方和

由表4可知，擬合優(yōu)度： 第一組中R12=0.9494，修正的可決系數(shù)Adjusted R Square為0.9478，并且大于第二的R22=0.8396，更接近1，說明揮發(fā)分在一定程度上影響彈筒發(fā)熱量，通過對比可以得出：用Qb，ad與Mad、Aad、Vad建立的數(shù)學回歸方程的擬合度要優(yōu)于用Qb，ad與Mad、Vad建立的數(shù)學回歸方程；公式中只有5.06%是由其他因素引起的。

3.3 標準偏差

由表4可知，標準偏差為0.2705，說明相關(guān)點離散程度小，估計值準確度較高。

3.4 F檢驗

針對E0：b1=b2=b3=0，在給定的顯著性水平α=0.05，在F分布表中查出自由度為k-1=3，n-k=96的臨界值F0.05（3，96）=2.699，由表5中數(shù)據(jù)可知F=600.127>2.699，應(yīng)決絕原假設(shè)H0，說明回歸方程顯著，即空干基水分、空干基灰分、空干基揮發(fā)分對彈筒發(fā)熱量有顯著影響。

3.5 T檢驗

針對E0：b1=b2=b3=0，在給定的顯著性水平α=0.05，在T分布表中查出自由度為k-1=3，n-k=96 的臨界值T0.05（3，96）=1.662。由統(tǒng)計數(shù)據(jù)可知：b1、b2、b3對應(yīng)的統(tǒng)計量分別為-33.7123、-14.4278、-1.8489，其絕對值均大于1.662，這說明分別都應(yīng)當拒絕假設(shè)E0，即當其他變量不變的情況下，解釋變量空干基水分、空干基灰分、空干基揮發(fā)分分別對被解釋變量彈筒發(fā)熱量都有顯著影響。

4 回歸校核數(shù)學模型的應(yīng)用

對該煤種某個月的化驗結(jié)果帶入多元線性方程進行驗證。

由表6中數(shù)據(jù)可知，表中試驗樣品的計算值與實際測量的差值全部小于國標中規(guī)定的再現(xiàn)性臨界值0.3MJ/kg。

應(yīng)用該多元線性方程只能作為校核使用，不能代替煤質(zhì)化驗過程。并且要求在實驗的過程中應(yīng)該嚴格按照國標操作，任何一項出現(xiàn)錯誤都會直接導(dǎo)致結(jié)果偏差?；貧w校核的多元線性方程使用于單一煤種，在煤種多的情況下，需要建立多個方程。

5 結(jié)論

面對目前多變的煤炭市場，單一煤種回歸校核數(shù)學模型的建立與推廣應(yīng)用在火電廠具有很高的利用價值，尤其適合煤種多，人員少的入廠煤化驗中。利用該回歸方程可以及時的發(fā)現(xiàn)實驗中的誤差，糾正實際工作的錯誤，提高工作效率，是燃料化驗質(zhì)量控制體系的重要工具；同時能夠應(yīng)用與入爐煤質(zhì)檢驗分析中，為鍋爐優(yōu)化摻燒配及煤耗計算提供依據(jù)；供煤商也可以用其對化驗結(jié)果進行核對；也能為缺乏檢驗條件的小型用煤企業(yè)提供一定的應(yīng)用價值。

參考文獻

[1] 林力.關(guān)于進口煤炭高位發(fā)熱量計算公式的探討[J].寧波化工.

[2] 鄭旭振，康紅生等.煤炭發(fā)熱量與灰分回歸計算方程的建立與應(yīng)用[J].機械管理開發(fā).2001，27-28.

篇4

【關(guān)鍵詞】 丙型肝炎病毒

Establishment of stably transfected HepG2 cell line expressing HCV scNS4A/NS3 protease

【Abstract】 AIM: To construct a eukaryotic expression vector of HCV single chain serine protease (scNS4A/NS3) and to obtain its stably transfected HepG2 cell line. METHODS: According to the sequence of HCV scNS4A/NS3 gene from the literature， the primers amplifying the gene coding scNS4A/NS3 protease were designed. HCV RNA was extracted from the HCV positive serum and the gene coding scNS4A/NS3 protease was amplified via RTPCR. The PCR product was digested by BamHⅠ/HindⅢ and purified by gel extraction. This fragment was inserted into pcDNA3.1(-) with T4 ligase and transformed into E.coli JM109. The positive recombinant plasmid was selected and identified via sequence assay and restrictive enzyme digestion. The recombinant plasmid was then transfected into HepG2 cell by LipofectAMINE2000. The cells containing stable transformants were selected by the ability of resistance to G418. The stably transfected cell line was identified by RTPCR and IFA and Westernblot. RESULTS: The eukaryotic expression vector named pcDNA3.1(-)scNS4A/NS3 was successfully constructed and the stably transfected HepG2 cell line which expressed scNS4A/NS3 protease was obtained. CONCLUSION: The stably transfected HepG2 cell line expressing single chain serine protease facilitates the establishment of cellbased system in evaluating antiHCV serine protease drug.

【Keywords】 hepatitis C virus; single chain serine protease; lipofectamine， transfection; colone cells

【摘要】 目的：構(gòu)建丙型肝炎病毒單鏈絲氨酸蛋白酶（scNS4A/NS3）的真核表達載體；建立重組質(zhì)粒穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的HepG2細胞克隆. 方法：根據(jù)文獻報道設(shè)計擴增scNS4A/NS3編碼基因的引物，從HCV陽性患者血清中提取病毒RNA，RTPCR方法擴增出scNS4A/NS3基因片段， BamHⅠ/HindⅢ雙酶切后連接到經(jīng)同樣酶切的真核表達載體pcDNA3.1(-)，轉(zhuǎn)化菌株JM109感受態(tài)細胞，獲得重組質(zhì)粒pcDNA3.1(-)～scNS4A/NS3，經(jīng)酶切鑒定及序列測定. 將陽性重組質(zhì)粒用脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染HepG2細胞，經(jīng)持續(xù)G418壓力選擇和克隆化獲得穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細胞系，用RTPCR，IFA，Westernblot證實該穩(wěn)定細胞系可以表達單鏈絲氨酸蛋白. 結(jié)果：成功構(gòu)建了真核表達載體pcDNA3.1(-)scNS4A/NS3；建立了穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的HepG2細胞克隆，命名為scpHepG2. 結(jié)論：獲得穩(wěn)定的scpHepG2細胞克隆可表達單鏈絲氨酸蛋白，為下一步建立以細胞為基礎(chǔ)的評價抗HCV絲氨酸蛋白酶藥物系統(tǒng)奠定基礎(chǔ).

【關(guān)鍵詞】 丙型肝炎病毒；單鏈絲氨酸蛋白酶；轉(zhuǎn)染，脂質(zhì)體法；細胞克隆

0引言

穩(wěn)定、可靠的細胞培養(yǎng)系統(tǒng)和小動物實驗?zāi)Ｐ偷娜狈O大地制約著抗丙型肝炎病毒(HCV)研究的深入和發(fā)展［1］. 因此以在HCV RNA復(fù)制和蛋白前體加工成熟中起著關(guān)鍵作用的酶分子為靶位的測定系統(tǒng)常被用于抗HCV 藥物的篩選. 酶抑制劑作為一個有潛力的藥物分子，它不僅需要有效，也需要有良好的藥物動力學等特征，如易進入細胞、結(jié)構(gòu)穩(wěn)定. 所以建立一種可以在細胞水平上評價酶活性的細胞系統(tǒng)非常關(guān)鍵. NS3絲氨酸蛋白酶在HCV多聚蛋白前體加工成熟中起關(guān)鍵作用，是抗HCV研究的主要靶標分子［2］. 我們通過構(gòu)建HCV單鏈絲氨酸蛋白酶（scNS4A/NS3）的真核表達載體，獲得重組質(zhì)粒穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的HepG2細胞克隆，為下一步建立以細胞為基礎(chǔ)的評價抗HCV絲氨酸蛋白酶藥物的系統(tǒng)奠定基礎(chǔ).

1材料和方法

1.1材料

E.coli. JM109菌株、pcDNA3.1(-)質(zhì)粒由本室保存. Taq DNA聚合酶、限制性內(nèi)切酶BamHI，HindⅢ等購自TaKaRa公司，膠回收試劑盒購自Vgene公司，T4 DNA連接酶購自上海生物工程公司，F(xiàn)ITC和HRP標記羊抗鼠IgG， DNA分子標準、低分子蛋白質(zhì)標準分別購自華美生物工程公司. 反轉(zhuǎn)錄試劑盒SuperscriptⅡ，Trizol，Lipofecatmine2000，G418購自Gibco公司. NS3mAb由本室制備［3］.

1.2方法

1.2.1HCV RNA的提取與cDNA第一鏈的合成以HCV陽性患者的血清為材料提取病毒RNA，方法參照Trizol說明書，將RNA沉淀溶于20 μL不含RNase的去離子水. 反轉(zhuǎn)錄按SuperscriptⅡ說明書進行，模板為病毒RNA，反轉(zhuǎn)錄引物為scNS4A/NS3基因下游引物，最后獲得cDNA第一鏈.

1.2.2scNS4A/NS3基因的PCR擴增參考文獻［4］，設(shè)計擴增scNS4ANS3基因的引物: P1，5′ CGGATCCATGGCGCCTATCGGCTCAGTAGTAATCGTAG

GCAGAATCATCCTGTCCGGCCGTGGTGGCCCTATTA

CGGCCTACTCCCAAC 3′; P2， 5′ CGCGGTACCTAGGCAAAACCAGAACCAGC 3′. 上述引物均由上海生工公司合成. 以病毒cDNA第一鏈為模板擴增scNS4A/NS3基因，體系為：模板5 μL，10×Buffer 5 μL ，10 mmol/L dNTPs 4 μL，p1，p2各2 μL，Taq 2 μL，用超純水補至終體積50 μL. 條件: 預(yù)變性94℃ 5 min，94℃ 1 min，60℃ 50 s，72℃ 1 min共 30個循環(huán)， 72℃延伸10 min. 質(zhì)粒構(gòu)建按參考文獻［5］進行，獲得pcDNA3.1(-)scNS4A/NS3重組質(zhì)粒. 酶切進行鑒定并交由上海生工公司測序.

1.2.3細胞培養(yǎng)和G418工作濃度的確定常規(guī)培養(yǎng)HepG2細胞于12孔板中，50 mL/L CO2，37℃，培養(yǎng)基為RPMI 1640 (100 mL/L胎牛血清，100 mg/L青、鏈霉素，2 mmol/L谷氨酰胺)，至細胞密度達90%布滿時，加入含G418的培養(yǎng)液1 mL/孔（G418終濃度分別為200～1000 mg/L，8孔）. 換液時保持G418濃度穩(wěn)定不變，持續(xù)培養(yǎng)3～4 wk.

1.2.4細胞轉(zhuǎn)染與篩選穩(wěn)定細胞克?、儋|(zhì)粒制備：將pcDNA3.1(-)scNS4A/NS3質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌感受態(tài)細胞JM109，挑取菌落接種5 mL LB，37℃振搖，12 h后離心收菌. 用去內(nèi)毒素超純質(zhì)粒提取試劑盒（博大泰克公司）提取質(zhì)粒，紫外分光光度法測定DNA含量和純度. ②細胞轉(zhuǎn)染：將HepG2細胞培養(yǎng)于24孔板，待細胞90%鋪滿，采用脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染pcDNA3.1(-)scNS4A/NS3，具體操作按LipofectAMINE 2000說明書進行. ③建立穩(wěn)定的細胞克?。翰捎肎418壓力選擇. 上述轉(zhuǎn)染48 h后，通過G418壓力篩選2 wk后，細胞成團，用槍頭挑取單個細胞團種在96孔板，繼續(xù)加G418壓力選擇，直到最后獲得單獨穩(wěn)定生長的細胞克隆，擴大培養(yǎng)后檢測并凍存. 獲得的細胞克隆凍存2 mo后復(fù)蘇，檢測細胞克隆的穩(wěn)定性.

1.2.5穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞系的檢測①RTPCR檢測穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞中目的基因的mRNA： 將穩(wěn)定生長的細胞用PBS清洗一次后，參照說明書用Trizol試劑盒提取細胞總RNA，然后反轉(zhuǎn)錄合成cDNA，按SuperScriptTM II反轉(zhuǎn)錄試劑盒（Gibco公司）操作說明進行. 用P1和P2對反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物進行PCR. PCR反應(yīng)體系及反應(yīng)條件同前. ②免疫熒光檢測：用胰蛋白酶消化穩(wěn)定生長的細胞，吹勻，將之加入鍍膜片小孔中，每孔15 μL，置于濕盒中，37℃， 50 mL/L CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)12 h，40 g/L多聚甲醛固定，NS3 mAb作為一抗，F(xiàn)ITC標記的羊抗鼠IgG作為二抗，500 g/L的甘油封閉后在熒光顯微鏡下觀察. 同時以轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒pcDNA3.1（-）的HepG2做為對照. ③Westernblot檢測目的蛋白的表達:在六孔板中培養(yǎng)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細胞，待細胞鋪滿后，用PBS清洗細胞3次，然后每孔加入100 μL 2×SDS上樣緩沖液，用細胞刮刀將細胞分離置于離心管中. 用細胞超聲粉碎儀破碎細胞，煮沸5 min，離心收集上清備用，同時用空質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的HepG2做對照. 按Biorad垂直電泳儀說明書，配置40 g/L濃縮膠和120 g/L分離膠，取20 μL細胞處理液上樣，電壓120 V，1.5 h后將蛋白轉(zhuǎn)移至醋酸纖維素膜（NC），NS3 mAb作為一抗，HRP標記的羊抗鼠IgG作為二抗，DAB顯色.

2結(jié)果

2.1PCR產(chǎn)物和重組質(zhì)粒的鑒定結(jié)果取PCR產(chǎn)物5 μL行10 g/L瓊脂糖電泳結(jié)果顯示擴增出約590 bp的片段，大小與目的片段相符. 重組質(zhì)粒經(jīng)BamHⅠ/HindⅢ酶切后，酶切產(chǎn)物大小與預(yù)期相符（圖1），說明重組真核表達載體構(gòu)建正確. 序列測定結(jié)果與文獻報道相同.

2.2G418工作濃度的確定可觀察到1000，900，800 mg/L孔于第2日，700和600 mg/L孔于第3日，500，400，300 mg/L孔于第5日，200 mg/L孔于第6日開始出現(xiàn)生長抑制現(xiàn)象，細胞開始溶解. 20 d后，G418濃度≤700 mg/L的各孔細胞穩(wěn)定生長，而1000，900，800 mg/L的3孔相繼全部死亡. 可以認為在本實驗條件下G418的最佳工作濃度為800 mg/L.

2.3穩(wěn)定轉(zhuǎn)染HepG2細胞系檢測

2.3.1RTPCR檢測穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞的目的基因RTPCR產(chǎn)物行10 g/L瓊脂糖電泳. 可見在預(yù)期大小處（590 bp）有一條亮帶(圖2).

2.3.2免疫熒光檢測穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞的目的蛋白在熒光顯微鏡下可以觀察到綠色熒光主要分布在細胞質(zhì). 而轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒pcDNA3.1(-)的HepG2細胞綠色熒光為陰性(圖略).

2.3.3蛋白印跡檢測目的蛋白DAB顯色后可見在預(yù)期大?。∕r 22 000）處有一特異條帶. 而轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒pcDNA3.1(-)的HepG2細胞沒有染出條帶(圖3).

3討論

HCV NS3蛋白編碼基因全長共1893個核苷酸. NS3蛋白近N端1/3 (1～180aa)具有絲氨酸蛋白酶活性. 近C端2/3具有三磷酸核苷酶(NTPpase)和解旋酶(Helicase)活性［6］. NS3絲氨酸蛋白酶在四個連接區(qū)域切割多聚蛋白前體：NS3／NS4A，NS4A／NS4B，NS4B／NS5A，NS5A／NS5B. 隨著NS3絲氨酸蛋白酶得到表達和純化，1996年Kim等［7］分別利用晶體衍射獲得了NS3蛋白及蛋白酶的晶體結(jié)構(gòu)，明確了酶活性所需的必需條件和輔助因子，其中NS4A中間的12個氨基酸是絲氨酸活性發(fā)揮必需的. Dimasi等［8］將NS4A核心區(qū)域通過連接子與NS3絲氨酸蛋白酶區(qū)域構(gòu)建為一條單鏈蛋白，經(jīng)原核表達后獲得的純化蛋白具有NS3絲氨酸蛋白酶的活性.

本研究中，我們首先設(shè)計了擴增單鏈NS3絲氨酸蛋白酶的引物，上游引物中含有NS4A的核心區(qū)21～43aa的基因序列，兩者之間設(shè)計了一個RGGP的連接序列，該序列可以形成β片層結(jié)構(gòu)，從而使得NS4A能夠起到輔助因子的作用，這樣保證了單鏈蛋白具有良好的絲氨酸蛋白酶活性. 以HCV陽性患者的血清為材料，提取病毒RNA，將之反轉(zhuǎn)錄為cDNA模板，擴增出了單鏈絲氨酸蛋白酶的基因序列. 用構(gòu)建的真核表達質(zhì)粒pcDNA3.1(-)scNS4A/NS3轉(zhuǎn)染肝癌細胞系HepG2，獲得單獨穩(wěn)定生長的細胞克隆，擴大培養(yǎng)后檢測并凍存. 我們用RTPCR方法和間接免疫熒光、蛋白印跡的方法，從基因水平和蛋白水平上檢測到單鏈絲氨酸蛋白酶在細胞獲得表達.

本實驗結(jié)果表明，我們成功地構(gòu)建了包含HCV scNS4A/NS3基因序列的真核表達載體pcDNA3.1(-)scNS4A/NS3，建立了其穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的HepG2細胞株，該細胞株能夠穩(wěn)定表達單鏈絲氨酸蛋白酶，為下一步建立以細胞為基礎(chǔ)的評價抗HCV絲氨酸蛋白酶藥物的系統(tǒng)奠定了基礎(chǔ).

【參考文獻】

［1］ 張景霞，周紅超，徐德忠，等. HCV C區(qū)基因在SP2/0細胞及荷瘤小鼠瘤內(nèi)的表達［J］. 第四軍醫(yī)大學學報， 2002， 23(24):2236-2239.

［2］ Hugle T， Cerny A. Current therapy and new molecular approaches to antiviral treatment and prevention of hepatitis C［J］. Rev Med Virol， 2003， 13:361-371.

［3］ Yang J. Expression of HCV NS3 protein， preparation of its Mabs and determination of their bingding region ［D］. 第四軍醫(yī)大學研究生學位論文， 2005:56-58.

［4］ Berdichevsky Y， Zemel R， Barchmatov L， et al. A novel high throughput screening assay for HCV NS3 serine protease inhibitors ［J］. J Virol Methods， 2003，107:245-255.

［5］ 劉衛(wèi)東，薛小平，雷迎峰，等. 丙型肝炎病毒ns5b基因的克隆、表達及鑒定［J］. 第四軍醫(yī)大學學報， 2003， 24(14):1265-1267.

［6］ Rosenberg S. Recent advances in the molecular biology of hepatitis C virus ［J］. J Mol Biol， 2001，313:451-464.

［7］ Kim JL， Morgenstern KA， Lin C， et al. Crystal structure of the hepatitis C virus NS3 protease domain complexed with a synthetic NS4A cofactor peptide［J］. Cell， 1996， 87:343-355.

篇5

關(guān)鍵詞 膽堿酯酶活力快速測定盒 有機磷中毒 鹽酸戊乙奎醚注射液

資料與方法

2005年1月～2006年12月收治有機磷農(nóng)藥中毒患者中隨機抽樣62例為A組，均符合文獻的診斷及分級標準［1］；2007年1月～2010年1月收治有機磷農(nóng)藥中毒患者中隨機抽樣62例為B組，符合文獻的診斷及分級標準，根據(jù)文獻分級標準。A組用藥方法及用量，見表1。

B組經(jīng)膽堿酯酶活力快速測定盒檢測。A、B兩組患者在性別、年齡、中毒種類、中毒量及搶救時間、臨床表現(xiàn)，中毒途徑等方面比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。具有可比性，見表2。

治療方法：兩組患者均經(jīng)急診清除毒物、應(yīng)用氯解磷定、阿托品及長托寧聯(lián)合治療等積極對癥治療。在此基礎(chǔ)上A組未經(jīng)膽堿酯酶活力快速測定盒檢測，僅憑醫(yī)生分級及臨床經(jīng)驗用藥；B組經(jīng)膽堿酯酶活力快速測定盒檢測后用藥。首次給藥后觀察30分鐘，若中毒癥狀未消失，經(jīng)膽堿酯酶活力快速測定盒檢測全血膽堿酯酶活力＜50%時，基于首次用藥量的半量再次給藥；中毒癥狀基本消失，全血膽堿酯酶活力＞50%可暫停藥觀察；若中毒癥狀消失，但全血膽堿酯酶活力仍＜50%時，則追加長托寧及阿托品1～2mg，至出現(xiàn)阿托品化或全血膽堿酯酶活力＞50%以上，依此方法兩組各治療3天。

觀察指標：比較觀察兩組的用藥次數(shù)、起效時間、中毒癥狀消失時間、平均住院時間，死亡率和不良反應(yīng)率。

統(tǒng)計學方法：使用SPSS13.0軟件進行數(shù)據(jù)分析，計數(shù)資料組建比較采用X2>/sup>檢驗；計量資料數(shù)據(jù)采用（X±s）表示，組間比較采用t檢驗，P＜0.05為差異，有統(tǒng)計學意義。

結(jié) 果

A組治愈55例（88.7%），死亡7例（8.1%）；B組治愈61例（98.4%），死亡1例（1.6%），死亡患者均為服藥量＞200ml、距救治時間>2h，反復(fù)給藥未出現(xiàn)阿托品化，死因多為多器官功能衰竭。兩組治愈率比較，有統(tǒng)計學意義（X2>/sup>4.8103，P0.0282）。B組用藥次數(shù)、起效時間、中毒癥狀消失時間、平均住院時間均比A組減少（P均＜0.01），見表3。

不良反應(yīng)：B組不良反應(yīng)對比A組不良反應(yīng)減少（P＜0.05），見表4。

討 論

有機磷中毒是基層醫(yī)院常見的急診病之一，中毒機制為抑制膽堿酯酶活性，使乙酰膽堿大量堆積，作用于膽堿能受體造成中樞、呼吸、循環(huán)等系統(tǒng)功能紊亂，產(chǎn)生毒蕈堿、煙堿和中樞癥狀而引起死亡［2］。膽堿酯酶復(fù)能劑只能對中毒24～48小時內(nèi)未老化的膽堿酯酶起作用，最長能用5～7天，超過此期限后作用微甚且加大不良反應(yīng)［3］，因此強調(diào)早期、足量、科學的應(yīng)用膽堿酯酶復(fù)能劑、阿托品及長托寧。

膽堿酯酶活力快速測定盒能快速、準確的檢測出全血膽堿酯酶活力，為臨床提供早期、準確、科學的用藥依據(jù)，也可隨時監(jiān)測全血膽堿酯酶變化，隨時追加給藥。保證了早期、足量的氯解磷定、阿托品及長托寧的應(yīng)用，避免了多次給藥，使有機磷農(nóng)藥中毒患者得到了科學的治療。膽堿酯酶活力快速測定盒在有機磷中毒治療中，有著較高的指導(dǎo)價值。

參考文獻

1 孟昭全,李芳,張春之,等.實用農(nóng)藥中毒急救［M］.北京:人民衛(wèi)生出版社,2004:113-168.

2 孔令振,李愛霞,李杰,等.長托寧治療急性有機磷農(nóng)藥中毒的療效觀察［J］.實用診斷與治療雜志,2007,21（1）:63-64.

3 陸再英,鐘南山.內(nèi)科學［M］.北京:人民衛(wèi)生出版社,2006:960-967.

表3 兩組有機磷農(nóng)藥中毒患者治療效果比較（X±S）

表4 兩組有機磷農(nóng)藥中毒患者不良反應(yīng)比較［例（%）］

表1 A組用藥方法及用量

篇6

雞蛋營養(yǎng)豐富，但不宜在發(fā)燒期間多吃，尤其是煎荷包蛋或炒雞蛋。因為雞蛋的主要成分是卵蛋白，卵蛋白是一種完全蛋白質(zhì)，99．7％能被人體吸收。人攝入這種蛋白質(zhì)后會產(chǎn)生一定的額外熱量，使機體熱量增高，加劇發(fā)燒癥狀。同理，發(fā)熱時也不要吃太多瘦肉、魚等高蛋白食物。

發(fā)燒病人的飲食應(yīng)清淡、易消化，一般以流質(zhì)或半流質(zhì)食物為主，如米湯、稀飯、面條、藕粉等，并搭配一些新鮮水果。

退燒后，可以食用雞湯面、菜泥粥等食物。到病情恢復(fù)后期可以多補充瘦肉、魚、豆腐等高蛋白食物。

（文華）

鴨血是液體肉

鴨血也稱“液體肉”，通常被制成血豆腐，是補血佳品。鴨血富含鐵，且以血紅素鐵的形式存在，容易被人體吸收利用。多吃可以防治缺鐵性貧血，并能有效地預(yù)防中老年人冠心病、動脈硬化等癥。

鴨血還是人體污物的“清道夫”，可以利腸通便，清除腸腔的沉渣濁垢，對塵埃及金屬微粒等有害物質(zhì)具有凈化作用。

因此，貧血患者、老人、婦女和從事粉塵、紡織、環(huán)衛(wèi)、采掘等工作的人尤其應(yīng)該常吃鴨血。

鴨血還含有維生素K，能促使血液凝固，有止血的功效。

鴨血中脂肪含量非常低，適合血脂高的人經(jīng)常食用。

在日本和歐美食品市場上，鴨血多被做成香腸、點心等。在我國，人們則喜歡用鴨血制成血豆腐做菜，還可以做湯，不但味道鮮美，而且可以起到植物蛋白和動物蛋白營養(yǎng)互補的作用。（小康）

奶茶是女性心臟的殺手

多少年來，健康專家一直提醒，飲茶有益于人的心臟。但一項最新研究提出，向提神的茶水中加入牛奶，或茶與牛奶(奶茶)同飲，會破壞茶水中的所有健康成分，對心臟有很大危害。

統(tǒng)計顯示，目前女性心血管疾病發(fā)病率已經(jīng)是乳腺癌發(fā)病率的10倍，是直接威脅女性生命的“頭號殺手”。德國研究人員在《歐洲心臟雜志》上發(fā)表的一份研究報告稱，喝奶茶會讓人的血管壁的收縮能力明顯下降，對心臟十分有害。

目前，女性心血管疾病的發(fā)病情況并沒有引起人們的重視。多數(shù)女性知道如何預(yù)防乳癌和皮膚癌，但很少有人擔心自己會得心臟病。因此，對于疲倦、呼吸困難、惡心、身體不適、背痛和腹痛之類的癥狀，許多女性都會選擇“挺一挺”。殊不知，這些看似普通的癥狀，很可能是你的心血管出現(xiàn)“疲態(tài)”的一個信號。在此提醒廣大女性朋友注意呵護自己的心臟，盡量遠離奶茶。 （小麗）

孕產(chǎn)婦不宜使用風油精

夏天，風油精是人們隨身備用的物品，它具有提神醒腦、解暑避邪、祛風鎮(zhèn)痛、驅(qū)蚊止癢等功效。而它的主要成分之一樟腦卻具有一定的毒副作用。

風油精所含的樟腦進入人體后，正常情況下人體內(nèi)的葡萄糖磷酸脫氫酶會很快地與之結(jié)合，使之變成無毒物質(zhì)，然后隨小便一起排出體外，所以不會發(fā)生不良反應(yīng)。

然而由于生理上的變化，孕婦體內(nèi)的葡萄糖磷酸脫氫酶的含量會降低，懷孕3個月內(nèi)若過多地使用風油精，樟腦就會通過胎盤進入羊膜腔內(nèi)作用于胎兒，嚴重時可導(dǎo)致胎兒死亡引起孕婦流產(chǎn)。

剛出生的新生兒體內(nèi)也缺乏葡萄糖磷酸脫氫酶，產(chǎn)婦如大量使用風油精，樟腦會隨氣味透過新生兒嬌嫩的皮膚和黏膜滲入血液，使紅細胞破裂，溶解成膽紅素。血液中的膽紅素含量過高，就會透過腦膜與腦細胞結(jié)合，引起嬰兒黃疸癥，還可出現(xiàn)抽風、驚厥等神經(jīng)癥狀，即使經(jīng)過治療也可能使嬰兒腦功能受損。所以，孕產(chǎn)婦應(yīng)慎用風油精。

（小美）

堿性食物提高智商

英國科學家發(fā)現(xiàn)，人體液的酸堿度與孩子的智力有關(guān)。在體液酸堿性允許的范圍內(nèi)，酸性時孩子智力低，堿性時智力高。科學家對6～13歲孩子的智力觀察發(fā)現(xiàn)，大腦中的體液ph值大于7者比小于7者智商高一倍?？茖W家把這一發(fā)現(xiàn)稱為智力水平的“化學標記”。

食品可分為堿性、中性和酸性三大類：

含鉀、鈉、鈣、鎂等元素的食品為堿性食品，如水果、蔬菜、豆制品、海帶、堿性飲料等。

含磷、氯、硫、碘等元素的食品為酸性食品，如肉類、谷物、油脂、酒類等。

不過，具有酸味的食品不一定是酸性食品，以橘子為例，它含有豐富的鉀，所以它不是酸性食品，而是堿性食品。

（大周）

牛奶加蜂蜜少女不痛經(jīng)

相當數(shù)量的未婚女性，每次來月經(jīng)前往往有下腹疼痛、腰膝酸軟、全身倦怠乏力等不適感，這就是令人苦惱的痛經(jīng)。

經(jīng)期出現(xiàn)這類癥狀，主要原因是青春期女性的子宮頸比較細長，或未發(fā)育完好，經(jīng)血流經(jīng)子宮頸時會刺激子宮肌收縮引起疼痛。

雖然絕大多數(shù)女性痛經(jīng)屬于生理現(xiàn)象，但疼痛的惡性刺激常使人坐臥不寧、睡眠不安。

婦產(chǎn)科專家提出的方案可幫你減輕痛苦：每晚睡前喝一杯加一勺蜂蜜的熱牛奶，即可緩解甚至消除痛經(jīng)之苦。

牛奶含鉀多，蜂蜜富含鎂。研究表明，鉀對于神經(jīng)沖動的傳導(dǎo)、血液的凝固過程以及人體所有細胞的機能都極為重要，它能緩和情緒，抑制疼痛，防止感染，并減少經(jīng)期失血量；鎂能幫助大腦中神經(jīng)沖動傳導(dǎo)，能讓具有神經(jīng)激素作用的活性物質(zhì)維持在正常水平。在月經(jīng)后期，鎂元素還能起到心理調(diào)節(jié)作用，有助于身體放松，消除緊張心理，減輕壓力。

另外，B族維生素對經(jīng)前緊張癥有顯著療效，特別是維生素B6最為重要。此種維生素能夠穩(wěn)定情緒，幫助睡眠，使人精力充沛，并能減輕腹部疼痛。香蕉中含維生素B6較多，痛經(jīng)女性不妨多吃一些。 （小劉）

鹽是女人美麗的天敵

1. 雀斑、黃褐斑吃鹽過多，除了會使臉色黑黃外，臉頰還會長出雀斑。若同時攝取動物性脂肪和蛋白質(zhì)過多，則會影響肝臟正常代謝而使雀斑更顯眼。要想皮膚好，比較科學的方法是多喝水，幫助皮膚排毒，同時要把每天的食鹽攝取量控制在6克以下。

2. 頭發(fā)脫落、發(fā)質(zhì)枯黃吃太咸不僅會造成代謝性脫發(fā)，還會讓頭發(fā)變得枯黃。中醫(yī)理論上講，腎氣盛則頭發(fā)烏黑有光澤，腎氣虛則頭發(fā)干澀而枯黃。

3. 面部浮腫浮腫的原因有很多，但吃太咸可能是其中之一。

攝入過量的鹽會令水分代謝出現(xiàn)紊亂，水分滯留在體內(nèi)，會出現(xiàn)浮腫。少吃鹽、多吃利水的食物才能有所改善。

篇7

繭子的生活很簡單，甚至乏味，偶爾一陣微風襲來，也只夠撩撩發(fā)絲。但繭子不寂寞，白天有天上的云朵和她做伴，夜晚的蟲鳴是她最好的搖籃曲。繭子每天都會做天真的夢。這一個又一個簡單而又美麗的夢伴著繭子，讓她微笑地成長。

繭子喜歡安靜，呆在自己的世界里，做著自己的夢，時不時打個呼嚕，說些夢話。有時繭子會夢見自己舉著棒棒糖走在外面綠意充盈的阡陌上，風兒慈愛地撫過她的臉龐，草兒調(diào)皮地觸著她的小手。還有美麗的蝴蝶，辛勤的蜜蜂……繭子認為這就是世間最美麗的事情了吧。每天做著世間最美麗的事，繭子感覺好快樂。

繭子很簡單，但繭子有夢想。

繭子的夢想是化為夢中的蝴蝶，在花叢里為小草跳舞。繭子羨慕鳥兒，飛得那么高，那么遠；繭子喜歡魚兒，游得那么快，那么美；但繭子還是眷戀著那夢中美麗的蝶兒，小小的，上下翻飛，那么一大群，多美！有時，繭子還會由那些美麗天真的夢聯(lián)想到外面的世界：那一定是如夢中一般很精彩的吧，如果有朝一日能飛出這個寂寞的沙丘，到外面去領(lǐng)略一下，那該多好啊……小小的繭子做著小小的夢，想著小小的心事，許著小小的愿望，入眠了……

繭子的前生是一只毛毛蟲，她曾趴在菜葉上目睹過無數(shù)只閃爍著光芒的蝶群在陽光下無憂無慮地翩躚起舞，金色的陽光照亮了蝶兒的雙翅，也照亮了蟲蟲的心房。自此，蟲蟲也開始不斷地努力，成長，吐絲，結(jié)繭……變成了繭子。繭子是蟲蟲的夢，而化蝶是繭子的夢，繭子心中有這個夢，她要不斷努力，實現(xiàn)這個夢。

篇8

COSPLAY，一個現(xiàn)在經(jīng)常出現(xiàn)在各個媒體的詞匯，是青春，是潮流，是一種不一樣的生活方式，是一種與眾不同的體驗。

COSPLAY是英文Costume Play的簡略寫法，意思是指角色扮演。但因為這種譯法與游戲中的Role Play Game（RPG）同為角色扮演之意，所以還存在另一種譯法――服飾裝扮。以現(xiàn)今的COSPLAY而言，其形式及內(nèi)容一般是指利用服裝、小飾品、道具以及化裝來扮演ACG（anime，comic，game）中的角色或是一些日本視覺系樂隊以及電影中的某些人物。

在南京市田家炳高級中學，有著一群熱愛動漫的孩子。志同道合的他們，利用高中的課余時間開始了自己的COSPLAY活動。

也許在很多人眼中這樣的生活很辛苦，也很浪費時間。畢竟作為一個高中生，主要任務(wù)是學習，尤其是在高考的獨木橋上，每一分鐘似乎都是如此的寶貴。但是因為他們真的很喜歡COSPLAY，所以就下定決心去做這件事了。

不是簡單的美麗

在和孩子們聊天的時候，筆者翻閱著一張張充滿活力笑臉的COSPLAY照片。照片里的孩子或者身穿日本漫畫中的白衣藍裙，或者化身“網(wǎng)球小子”，或者是《死亡筆記》的L……仿佛真的是從漫畫里走下來的人，如此的美麗不禁讓我驚嘆。

COSPLAY社團的一名蘇姓同學卻認真的說：“每個人看到這些照片的時候都會羨慕和驚艷，其實COSPLAY 的美麗不是簡單的美麗。每一次做COSPLAY，我們在幕后付出的努力也是你們所感受不到的。”

每一套服裝都有自己的語言，它的語言會告訴你，什么樣的布料、什么樣的的色彩、什么樣的配飾、什么樣的現(xiàn)實背景，才是真正適合它的?！坝袝r候為了找合適的布料，我會花上很長時間。但是等到最終效果出來的時候，那滿心的歡悅是說不出來的?！保翱墒呛芏嗳瞬⒉幻靼證OSPLAY背后的辛苦，有很多人只看見表面的風光，只是喜歡那種表面的美麗，并不是喜歡它背后那種看不到的美麗。那樣的COSPLAY，不是真正意義上的COSPLAY?！碧K同學如是說。

理想與現(xiàn)實，一樣的收獲

通過和他們的聊天，筆者發(fā)現(xiàn)這群孩子其實都是努力而且現(xiàn)實的人。

處在高中階段的他們，雖然很喜歡COSPLAY，但是并沒有過于理想化。一名同學說，“愛好是愛好，現(xiàn)實是現(xiàn)實，我一直都分得很清。雖然我會一直把COSPLAY做下去，但那只是愛好而已，我還是會更注重高中課程的學習”。也許這就是他們一邊學習一邊游戲，卻仍可以游刃有余的原因。也正因為如此，COSPLAY社團的他們在生活中也收獲了“理想”和“現(xiàn)實”兩顆不一樣的果實。

“理想”的果實――與自己喜歡的漫畫人物來一個親密約會。每一次穿上不同的衣服，你就是那個人，這樣你就可以體味到不同的人生。有了COSPLAY，你也就有了一個與眾不同的人生。

篇9

你的世界是什么顏色？是否已經(jīng)像紙一樣蒼白？

合上書，我重重的嘆息。海子呵！為什么我從你的詩句中看到了對生活的熱愛，為什么你眼中的世界是陽光明媚，處處是金色的麥田，飛馳的駿馬?？涩F(xiàn)實的你卻是讓人絕望的悲涼……

是什么讓麥田枯萎，讓駿馬夭折，讓原本燦爛的陽光連笑容都有陰霾？

現(xiàn)在，請為我點燈。

你的世界不應(yīng)該隨著你的離去而消散。

我想，我想繼續(xù)那些美好，用一個個字符繼續(xù)構(gòu)建你想象中的童話。

一個個支離破碎的夢境。猜不透的，是你那顆簡單的赤子之心；讀不懂的，是你瞳孔中映射的美麗篇章。

為什么要絕望？是現(xiàn)實拋棄了你，還是你選擇了放棄？

現(xiàn)在，請為我點燈。

點亮我的虔誠心——美好的東西，值得人去信仰。

你是一個有信仰的人對嗎？

讓我猜猜，你是因為信仰的破碎才選擇放棄，選擇離去對嗎？

世界對你來說已經(jīng)不再值得留戀。

海子，你是一個可憐的孩子。

不止因為無奈的現(xiàn)實，更因為你迷茫的心……

你后悔過嗎？不，生命沒有后悔。

有的，只是那份對美麗的渴望。死亡不是結(jié)束，而是一個新的開始。

現(xiàn)在，請為我點燈。讓我學會歌頌，歌頌春天的到來，歌頌生命的美好，歌頌一切，歌頌一切簡單的幸福。

篇10

不曾想到我還會這般的做過，騎著單車載著片片楓葉，尋找初夏時的幽靜。雖然不是什么漫長的旅途，去的也不是什么名勝古跡，只是這座城市沉睡的簡單記憶，記憶在斑駁的古城墻，在建春門下來往的馬車鐵騎！

一時的興起換一下午的流連，載著簡單心輾轉(zhuǎn)在一條條小道，載一路的歡歌穿插在一個個亭榭。不知道怎么形容當時的心情，也許是繁雜的生活中簡單的輕松！

慢慢的回憶，讓每一片樹葉都流進我夢里，打著旋兒顫抖著飄起，讓五月的花香載著思念靜靜的彌漫，氤氳下的氣息會更美麗。看大江東去，章貢相聚，奔涌的江水打亂了安靜的思緒，讓閑適中帶滿豪氣，一個大大的水旋在我腳下不停轉(zhuǎn)動，仿佛將我也卷入氣勢宏博的水流當中，或是卷進了當年戰(zhàn)亂紛紛下的江河！

俯仰之間，在汀渚之上，風箏輕揚，稚氣的孩子追逐玩笑。立鼎之下，間或有人之微而自然之大！看路人家和圓團，依偎在兒時溫暖的胸懷！

停息在草坪邊，看美麗的小花，排著各種形狀，拍幾張照片，只可惜我無法用畫筆將其描繪。取道古城墻之下，沿著一條別致的小路，一邊是江水流逝，一邊是古墻巍峨。就像人生之路，一邊的流逝不復(fù)回的時光，一邊是深埋心底永不變更的回憶！而我們在這之間漸漸的走遠…