試析新會(huì)陳皮橙皮苷的量測(cè)定工藝
時(shí)間:2022-01-27 03:43:00
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【摘要】目的比較不同年份新會(huì)陳皮總黃酮和橙皮苷含量的變化規(guī)律。方法采用紫外分光光度法測(cè)定陳皮總黃酮的含量;用高效液相色譜法(HPLC)測(cè)定陳皮中橙皮苷的含量。結(jié)果不同年份新會(huì)陳皮貯存期越長(zhǎng),總黃酮含量和橙皮苷含量越高。結(jié)論總黃酮是陳皮有效成分之一,橙皮苷則是陳皮總黃酮的主要成分,實(shí)驗(yàn)結(jié)果驗(yàn)證古人所述陳皮“陳久者良”有一定的道理。
【關(guān)鍵詞】新會(huì)陳皮不同年份總黃酮橙皮苷
陳皮是蕓香科植物橘CitrireticulataBlanco及其栽培變種的干燥成熟果皮,藥材分為“陳皮”和“廣陳皮”。“廣陳皮”為茶枝柑Citrireticulata‘Chachi’的干燥成熟果皮,主產(chǎn)于廣東新會(huì),是廣東十大道地藥材之一,具有理氣健脾、燥濕化痰的功效。陳皮的主要有效成分為黃酮類(lèi)化合物和揮發(fā)油,其中橙皮苷是陳皮黃酮類(lèi)化合物的主要成分。中醫(yī)藥傳統(tǒng)上認(rèn)為陳皮“陳久者良”,南宋醫(yī)學(xué)家陶弘景曰“橘皮療氣大勝,須陳久者良”。本文對(duì)不同年份新會(huì)陳皮的總黃酮和橙皮苷含量進(jìn)行系統(tǒng)分析比較,驗(yàn)證陳皮“陳久者良”的物質(zhì)基礎(chǔ),為陳皮的有效開(kāi)發(fā)利用提供依據(jù)。
一、儀器與試藥
1.1儀器
SPD-10AVP高效液相色譜儀(日本島津公司);TU1810紫外分光光度計(jì)(北京普析通用儀器有限責(zé)任公司)等。
1.2材料與試劑
橙皮苷(中國(guó)藥品生物制品檢定所,批號(hào)110712-200512);甲醇為色譜純,其他試劑為分析純。陳皮樣品由新會(huì)陳皮協(xié)會(huì)提供,并由廣東藥學(xué)院藥用植物與中藥鑒定學(xué)教研室李書(shū)淵教授鑒定為茶枝柑CitriReticulata‘Chachi’的干燥成熟果皮。樣品粉碎成粗粉,置干燥箱于60℃烘干12h以上。于避光、陰涼處存放。
二、方法與結(jié)果
2.1不同年份新會(huì)陳皮總黃酮含量測(cè)定
2.1.1對(duì)照品溶液的制備
精密稱(chēng)取橙皮苷對(duì)照品11.37mg,用甲醇溶解并定容至50ml,制成0.2274mg/ml的橙皮苷對(duì)照品貯備液。
2.1.2供試品貯備液的制備
取樣品粉末約1.0g,精密稱(chēng)定,置索氏提取器中,加80ml石油醚(30~60℃)60℃提取至無(wú)色,放冷,揮去石油醚,再加80ml60%乙醇,索氏提取至無(wú)色,將提取液轉(zhuǎn)移置100ml量瓶中,用60%乙醇定容至刻度,混勻,即得。
2.1.3測(cè)定波長(zhǎng)的選擇
分別精密量取1.5ml對(duì)照品貯備液、0.5ml供試品貯備液至25ml量瓶中,用60%乙醇定容至刻度,混勻。以60%乙醇溶液為空白,在200~400nm之間進(jìn)行掃描。由圖1可見(jiàn)對(duì)照品溶液在285nm處有吸收峰,圖2可見(jiàn)供試品溶液在275nm處和331nm處有吸收峰。故選擇285nm為測(cè)定波長(zhǎng)。
2.1.4標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的繪制
取0.2274mg/ml的橙皮苷對(duì)照品貯備液,精密吸取0.5,1,1.5,2.0,2.5ml置于25ml量瓶中,用60%乙醇定容。在285nm處測(cè)定吸光度,并繪制校準(zhǔn)曲線(xiàn)。結(jié)果表明:在4.548~22.74μg/ml濃度范圍內(nèi)有良好的線(xiàn)性關(guān)系?;貧w方程為:A=0.033C+0.013,相關(guān)系數(shù)r=0.9993。
2.1.5穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)
精密量取供試品貯備液0.5置于~25ml量瓶中,用60%乙醇定容,在285nm處進(jìn)行測(cè)定,結(jié)果:0h的A值為0.573,1h為0.571,2h為0.568,4h為0.565,6h為0.564,24h為0.546,RSD為1.7%。結(jié)果表明,樣品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定性良好。
2.1.6重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)
取同一樣品6份,按“2.1.2”項(xiàng)制備成供試品貯備液并稀釋50倍,在285nm處連續(xù)測(cè)定6次A值,RSD為1.7%,說(shuō)明本實(shí)驗(yàn)的重現(xiàn)性良好。
2.1.7回收率實(shí)驗(yàn)
精密吸取對(duì)照品貯備液2.5ml稀釋到25ml的量瓶中,得到22.74μg/ml的對(duì)照品溶液。精密吸取供試品貯備液3ml稀釋定容到100ml,再分別精密吸取該溶液1ml置9個(gè)10ml量瓶,分別加入對(duì)照品溶液0.5,1,1.5ml各3份,稀釋定容,在285nm處測(cè)定其吸光度,并計(jì)算回收率。
2.1.8總黃酮測(cè)定
取適量不同年份新會(huì)陳皮按“2.1.2”項(xiàng)制備成供試品貯備液并稀釋50倍,在285nm處分別測(cè)定A值,計(jì)算出供試品中總黃酮的含量。
2.2橙皮苷含量測(cè)定
按照《中國(guó)藥典》2005版Ⅰ部陳皮項(xiàng)下含量測(cè)定方法,用外標(biāo)兩點(diǎn)法對(duì)不同年份新會(huì)陳皮的橙皮苷進(jìn)行測(cè)定。
三、分析與結(jié)論
用橙皮苷作對(duì)照品,用紫外分光光度法測(cè)定陳皮總黃酮的含量,通過(guò)方法學(xué)考察,該法操作較簡(jiǎn)便,準(zhǔn)確,重現(xiàn)性較好。
文獻(xiàn)研究表明,陳皮提取物具有抗氧化,有效清除自由基的作用;陳皮中黃酮類(lèi)成分除了具有抗氧化作用還有抗衰老作用,能有效延長(zhǎng)果蠅的壽命;橙皮苷能有效軟化心血管,增加心血管通透性,并能減輕家兔實(shí)驗(yàn)性動(dòng)脈粥樣硬化病變,證明陳皮中黃酮類(lèi)成分和橙皮苷都是具有藥理作用的活性化學(xué)物質(zhì)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí):新會(huì)陳皮的貯存年份越長(zhǎng),總黃酮和橙皮苷的含量越高,說(shuō)明古人所述陳皮“陳久者良”有一定的道理。
本實(shí)驗(yàn)用不同乙醇濃度進(jìn)行陳皮總黃酮的提取,結(jié)果顯示60%乙醇提取的效果最好。
通過(guò)水分測(cè)定,含量測(cè)定結(jié)果折合成干燥品的含量。
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