導(dǎo)語：天南星類中藥材研究論文一文來源于網(wǎng)友上傳，不代表本站觀點(diǎn)，若需要原創(chuàng)文章可咨詢客服老師，歡迎參考。

摘要應(yīng)用聚丙烯酰胺凝膠電泳(簡稱PAGE)技術(shù)，對(duì)天南星類中藥材進(jìn)行鑒別分析結(jié)果表明：三種天南星藥材樣品的PAGE圖譜完全不同，可作為天南星類中藥材鑒別的一種有效方法。

Abstract:

PolyacrylamideGelelectrophoresis［PAGE］wasusedtodeterminethetraditionalChinesemedicinalmaterialsofthreekindsArsaemaconsangumeumSchott.ResultsShowedthattheirPAGEbandswerealwaysquitedistinct,whichcanbeusedtoassesstheirquatityanddistinguishthemfromconfusablevarieties.

Keywords:ArisaemaconsangumeumSchott.Arisaemaheterophyllumbi.

pinelliapeclatisectaSchott.PAGEidentification.

天南星主要用于祛風(fēng)定驚，散結(jié)化痰。外用可治療瘡瘍腫毒、蛇蟲咬傷。近年來臨床上用于治療宮頸癌，有很好的療效。因天南星藥材親緣關(guān)系相近，性狀類別相似，用常規(guī)的性狀顯微鑒別方法很難鑒別分析。研究表明，天南星藥理作用的主要有效成分含有蛋白質(zhì)，故可應(yīng)用PAGE技術(shù)對(duì)其進(jìn)行鑒別［1］［2］。現(xiàn)報(bào)道如下。

1實(shí)驗(yàn)材料與儀器

天南星(ArisaemaConsanguineumSchott)樣品Ⅰ、異葉天南星(ArisaemaheterophyllumBi)樣品Ⅱ、虎掌(掌葉半夏)(PinelliapeclatisectaSchott)樣品Ⅲ，以上樣品均為鮮品，由湖北中醫(yī)學(xué)院藥學(xué)系鑒定教研室鑒定并提供。

DYY-Ⅲ4型雙穩(wěn)電泳儀、DYY-Ⅲ28型垂直板型電泳槽(北京六一儀器廠)。

2試劑的配制與凝膠的制備

2.1試劑配制

A：36.6g三羥甲基氨基甲烷(Tris)，48ml，1mol/L的Hcl加水到1000ml;B：5.98Tris,48ml,1molHcl加水到100ml；C：30g丙烯酰胺(Acr)，0.8g甲叉雙丙烯酰胺(Bis)加水到100ml過濾后使用；D：10gAcr,2.5gBis加水到100ml過濾后使用；E：4mg核黃素加水到100ml；F：40%(W/V)的蔗糖溶液；G：0.56g的過硫酸銨加水到100ml(AP溶液)；H：6gTris,28.8g甘氨酸加水到1000ml，使用時(shí)稀釋10倍，此為電極緩沖液。

2.2凝膠的制備及電泳槽的安裝［3］

2.2.1本實(shí)驗(yàn)采用垂直板電泳槽凝膠模子是由兩塊玻璃裝入一個(gè)用硅酮橡膠做成的夾套內(nèi)構(gòu)成，玻璃板厚2mm，兩玻璃板之間由夾套隔開厚約1.5mm，膠就在這兩板之間的膠室內(nèi)聚合成平板膠。安裝電泳槽時(shí)，玻璃板先用熱的去污劑刷洗或洗液浸泡，然后用熱水沖洗，再用蒸餾水沖洗，直立干燥。勿用手指接觸洗凈的玻璃板面，將兩塊玻璃板裝入橡膠夾套內(nèi)，然后垂直地裝入兩個(gè)半槽之間，用螺絲將兩個(gè)半槽固定在一起，注意在上螺絲時(shí)，要按照一定的順序一個(gè)個(gè)的逐步檸緊，均勻用力。電泳槽裝好后將熔化的1.5%的瓊脂注入背面槽內(nèi)的小池中，使在膠池的下部凝結(jié)成約0.5cm厚的瓊脂層，備用。

02.2.2分離膠的制備

將試劑A∶C∶水∶G按1∶2∶1∶4的比例(V/V)混合，然后按每ml膠液0.6μl的比例加入加速劑四甲基乙二胺(TEMED)、混合后立即裝入槽中，膠液加到距玻璃板頂部3cm處(注意排除可能存在的氣泡)，上面再加約4mm厚的水層以隔絕空氣并使膠面平坦。

2.2.3濃縮膠的制備

將試劑B∶D∶E∶F按1∶2∶1∶4的比例(V/V)混合，然后按每ml膠液1.5μl的比例加入TEMED。然后再加到吸去表面水層的分離膠上部，高約3cm，并放好樣品槽模板(俗稱梳子)，光照聚合，聚合約需30～40分鐘，膠聚合后，小心取出“梳子”，加入上槽電極緩沖液備用。

3樣品液的制備

精確稱取樣品Ⅰ2g加0.9%的生理鹽水4ml研磨成漿后置離心管中離心15分鐘(3000rpm/min)，取上清液2ml加入4ml丙酮沉淀離心，傾出上清液，將沉淀加2ml蒸餾水溶解后裝入半透膜袋中透析48小時(shí)(其間更換蒸餾水?dāng)?shù)次)，即得樣品液Ⅰ，置冰箱中備用。用同樣的方法處理Ⅱ、Ⅲ號(hào)樣品。

4點(diǎn)樣

用微量注射器分別吸取Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ號(hào)樣品液各25μl注入到樣品槽內(nèi)的電極緩沖液與濃縮膠之間界面上。并在上槽緩沖液中加入1～3滴溴酚藍(lán)指示劑示蹤。

5電泳

加樣后，向兩槽內(nèi)注入電極緩沖液，接通電源立即電泳。前后兩槽分別接入電源的負(fù)、正極上，開始電流調(diào)節(jié)為9mA,當(dāng)樣品進(jìn)入分離膠后，加大電流至12mA，當(dāng)指示劑到達(dá)凝膠未端約1cm時(shí)，停止電泳。

6染色

取出膠板后，放入0.2%的考馬斯亮藍(lán)(R250)染色液中，在36°C下染色1小時(shí)，用蒸餾水沖去凝膠表面附著的染料，再用含20%甲醇和7%醋酸的脫色液脫色，經(jīng)常更換脫色液，直至背景清晰為止。

7結(jié)果與討論

PAGE技術(shù)操作簡便，重現(xiàn)性良好，凝膠本身有較強(qiáng)的機(jī)械強(qiáng)度，在本實(shí)驗(yàn)中我們?cè)鲞^數(shù)次重復(fù)，所得電泳圖譜穩(wěn)定可靠，此外，采用垂直板型PAGE，操作及制膠板方便，并可在一塊膠上(120mm×100mm×1.5mm)同時(shí)進(jìn)行十幾種樣品的PAGE分析，且樣品和試劑用量少，符合多快好省的要求，特別適用于含有蛋白質(zhì)成分的各類中藥材(如：果實(shí)種子類、根皮類及動(dòng)物類中藥)的質(zhì)量分析及真?zhèn)舞b別。

參考文獻(xiàn)

1陳振江.高效電泳技術(shù)及其在藥劑學(xué)中的應(yīng)用中草藥，1994，16(9)：52

2陳振江.中藥青葙子、土鱉蟲的等電聚焦電泳的研究.中草藥，1996，27(10)：593

3袁曉華等.植物生理生化實(shí)驗(yàn).北京：高等教育出版社，1983.64