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篇1

目的 探討腦動(dòng)靜脈畸形出血誤診為腦外傷性血腫的原因。方法 回顧性分析6例患者的發(fā)病、臨床表現(xiàn)、CT及手術(shù)治療。結(jié)果 腦動(dòng)靜脈畸形出血與外傷性血腫有時(shí)相像，易引起誤診。結(jié)論 動(dòng)靜脈畸形出血可合并腦外傷，應(yīng)注意鑒別。

【關(guān)鍵詞】 動(dòng)靜脈畸形破裂；誤診；外傷性血腫

腦動(dòng)靜脈畸形（AVM）是腦血管發(fā)育障礙引起腦局部血管數(shù)量和結(jié)構(gòu)異常并對(duì)正常腦血流量產(chǎn)生影響的先天性疾?。?］。是神經(jīng)外科常見的血管性疾病，其發(fā)病率為0.04%～0.5%，占顱內(nèi)占位性病變的5%～9％；發(fā)生顱內(nèi)出血的概率為50%～68％［2］。臨床表現(xiàn)以畸形血管破裂出血為最常見癥狀，急性發(fā)作時(shí)可突發(fā)意識(shí)喪失合并腦外傷，易誤診為腦外傷。2007年2月至2008年2月筆者在北京解放軍總醫(yī)院學(xué)習(xí)期間共收治6例，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 臨床資料

1.1 一般資料

本組6例均為男性，年齡19～38歲，平均30.5歲。

1.2 臨床表現(xiàn)

均有頭部外傷昏迷史，均訴頭痛，其中沖擊傷4例，對(duì)沖傷2例，均經(jīng)頭顱CT檢查，證實(shí)為腦內(nèi)血腫，其中顳葉5例，枕葉1例，無(wú)顱骨骨折。均診斷為腦外傷性血腫。

1.3 治療方法

全部行血腫清除，去骨瓣減壓術(shù)。術(shù)中均見血管異常增多，為畸形血管團(tuán)。麻醉誘導(dǎo)降低血壓，沿病灶周圍電凝表淺的供血?jiǎng)用}，然后游離病變的表淺部分，進(jìn)而在病變尖端游離，最后分離與病變尖端相連的血管蒂.見到擴(kuò)張的動(dòng)脈可使用臨時(shí)阻斷夾，確認(rèn)是否為主要供血?jiǎng)用}，還是過(guò)路動(dòng)脈，并可以判斷血流的方向。病變分離至最后再斷引流靜脈。術(shù)中快速病檢報(bào)告為畸形血管，確診為腦動(dòng)靜脈畸形。術(shù)中出血800～1200mL，輸血600～1000mL。

1.4 結(jié)果

本組無(wú)死亡病例，術(shù)后全部行腦血管數(shù)字減影（DSA）檢查，評(píng)估手術(shù)效果，5例未見異常，1例殘留，為單支供血，單支引流，行30% NBCA栓塞治愈。術(shù)后無(wú)癲癇、偏癱、失語(yǔ)、二便失禁現(xiàn)象。均治愈出院。

2 討論

2.1 誤診原因

出血是動(dòng)靜脈畸形最常見的首發(fā)表現(xiàn)，在所有的AVM相關(guān)的出血中，60％為腦實(shí)質(zhì)內(nèi)的，30％為蛛網(wǎng)膜下腔，10％在腦室內(nèi)［2］。分析本組誤診原因有以下3點(diǎn)：（1）病史缺失。本組3例無(wú)目擊者，3例有目擊者但無(wú)法判斷昏迷與外傷的先后，既往無(wú)頭痛、癲癇等有意義的臨床癥狀，無(wú)家族史。提示對(duì)受傷機(jī)制不明確的腦內(nèi)血腫要考慮AVM的可能。（2）對(duì)受傷作用力與受傷程度缺乏有效評(píng)估方法。本組均無(wú)顱骨骨折，病灶位于腦實(shí)質(zhì)，腦表面無(wú)挫傷灶。（3）本病臨床較少見，入院時(shí)患者已有明確手術(shù)指征，且病情緊急。未仔細(xì)閱讀CT片，故造成誤診。

2.2 臨床特點(diǎn)及診斷

顱內(nèi)出血是造成動(dòng)靜脈畸形患者死亡的主要原因，其預(yù)后與出血部位及出血量密切相關(guān)。幕上腦出血量如達(dá)到正常腦容積的10％，將危及生命，而幕下血腫更為危險(xiǎn)［3］。多突然發(fā)病，表現(xiàn)為劇烈頭痛、惡心、嘔吐、頸項(xiàng)強(qiáng)直、偏癱及昏迷等高顱壓綜合征。由于AVM多為靜脈型出血，出血量較動(dòng)脈瘤破裂為少，病死率較低。血管造影仍是目前診斷AVM最可靠的方法。其典型影像表現(xiàn)為動(dòng)脈期可見粗細(xì)不等，扭曲迂回的血管團(tuán)，有時(shí)表現(xiàn)為網(wǎng)狀或血竇狀，供血?jiǎng)用}多增粗，引流靜脈早期顯影。由于盜血，病變以外的動(dòng)脈顯影不良，部分較小和（或）自身栓塞的AVM常不顯影。腦血管造影可明確AVM部位，畸形血管團(tuán)的供血?jiǎng)用}及引流靜脈，對(duì)臨床診斷和制定治療方案有重要價(jià)值［4］。對(duì)于部分來(lái)不及行DSA檢查的患者，CT掃描可以定位，明確腦內(nèi)有無(wú)血腫。典型表現(xiàn)為血腫周圍的蜿蜒狀，弧形凹入或尖角形輕微高密度影等影像可大致判斷血管團(tuán)的位置。增強(qiáng)后病灶邊界清晰，不規(guī)則，有混雜密度，附近可見粗大的引流靜脈［1］。MRI檢查可清楚顯示畸形血管團(tuán)，病灶呈低信號(hào)或無(wú)信號(hào)，表現(xiàn)為血管“流空現(xiàn)象”，可明確病灶與周圍結(jié)構(gòu)關(guān)系。在AVM顯示上MRI要優(yōu)于CT。CTA、MRA、DSA各有優(yōu)勢(shì)［5］。

2.3 手術(shù)體會(huì)與預(yù)后

顯微手術(shù)切除是徹底治療腦AVM的最好方法之一，目的在于阻斷供血?jiǎng)用}，切除畸形血管團(tuán)，解除盜血，預(yù)防出血。（1）術(shù)前要充分備血，本組術(shù)中出血較多，如單純補(bǔ)充晶體液致血液稀釋，可引發(fā)或加重出血。（2）常規(guī)準(zhǔn)備血管臨時(shí)阻斷夾，以利有效止血。（3）術(shù)野出現(xiàn)非噴射性動(dòng)脈樣出血，應(yīng)按AVM處理。（4）術(shù)中要先處理動(dòng)脈，后處理靜脈。切除部分或全部畸形血管團(tuán)送病理證實(shí)。

在出血急性期因血腫的存在，創(chuàng)面不清晰，腦組織腫脹，畸形血管團(tuán)不易辨認(rèn)，分離血管團(tuán)時(shí)止血困難，加上急診手術(shù)，可能思想上準(zhǔn)備不足。有學(xué)者建議二期處理血管團(tuán)為妥［6］。

另外需要注意高血壓腦出血與AVM的區(qū)別。對(duì)于下列情況可能有AVM存在：(1) 沒(méi)有明確的高血壓病史，盡管發(fā)病后血壓較高；平時(shí)可能有或無(wú)頭痛，或癲癇病史。（2）有顱內(nèi)壓增高癥狀甚至意識(shí)障礙，但癥狀發(fā)展較高血壓腦出血緩慢。（3）年輕患者且出血部位為非典型的高血壓腦出血部位。(4) CT顯示血腫邊界不規(guī)則或影像呈混雜密度，有鈣化及血腫周圍輕度水腫。

參考文獻(xiàn)

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［2］趙繼宗，王碩，隋大立，等. 2086例腦動(dòng)靜脈畸形臨床特征［J］. 中華神經(jīng)外科雜志，2004，3:113-117.

［3］張巖，趙繼宗，王碩，等. 腦動(dòng)靜脈畸形顱內(nèi)出血的急診手術(shù)治療［J］. 北京醫(yī)學(xué)，2005，27：471－473.

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篇2

【摘要】 目的 觀察三勒漿抗疲勞液對(duì)慢性疲勞大鼠模型的多因素影響作用，為深入探討其藥理學(xué)作用的機(jī)制奠定基礎(chǔ)。方法 采用長(zhǎng)時(shí)間反復(fù)強(qiáng)迫大鼠游泳及束縛四肢（限制大鼠的活動(dòng)）法，造成慢性疲勞的大鼠模型，懸尾法及力竭游泳法考查模型動(dòng)物行為學(xué)指標(biāo)，并采用ELISA法測(cè)定其細(xì)胞因子IL-1b、IL-6及神經(jīng)遞質(zhì)5-HT。結(jié)果 空白對(duì)照組動(dòng)物一般情況、行為學(xué)觀察及IL-1b、IL-6、5-HT等多項(xiàng)指標(biāo)與模型組比較差異有顯著性（P＜0.05或P＜0.01），證明模型成立。而三勒漿抗疲勞液具有改善造模大鼠一般情況及行為學(xué)指標(biāo)的作用。同時(shí)上調(diào)血清中IL-1b及腦組織中5-HT，與模型對(duì)照組比較，差異有顯著性（P＜0.05或P＜0.01）。結(jié)論 用強(qiáng)迫大鼠游泳（30min/d）及束縛四肢法（3h/d）造模，所形成的慢性疲勞大鼠模型更趨向于因心理應(yīng)激所形成的機(jī)體癥狀性疲勞模型，三勒漿抗疲勞液對(duì)此種慢性疲勞大鼠模型的一般情況、行為學(xué)指標(biāo)均有明顯的改善作用，對(duì)IL-1b、5-HT的上調(diào)，可能為其藥理學(xué)作用機(jī)理。

【關(guān)鍵詞】 三勒漿抗疲勞液；慢性疲勞；大鼠模型；實(shí)驗(yàn)研究

Using chronic fatigue rat model to investigate the pharmacologic mechanism of Sanajon oral liquid

【Abstract】 Objective To observe the effect of chronic fatigue rat model which influenced by Sanajon oral liquid， to study the pharmacology mechanism. Methods Adopt force rat swim and bondage on four limbs repeatedly ， to cause rat chronic fatigue ; By hanging rat tail and swimming exhaust physical strength approach， to observe rat ethology changes; Utilizing ELISA method， examination cytokine IL-1b， IL-6 and 5-HT.Results Comparing control group with chronic fatigue model group， there have significance difference about rat general condition， ethology changes， IL-1b， IL-6 in serum and 5-HT in brain(P＜0.05 or P＜0.01). At the same time， all of above examination item can be improve by Sanajon oral liquid(P＜0.05 or P＜0.01).Conclusion This kind of chronic fatigue rat model have more psychological stress which induce to psychological fatigue， Sanajon oral liquid can improve model rat’s general condition， ethology changes， IL-1b， IL-6 in serum and 5-HT in brain.

【Key words】 anti-fatigue Sanajon oral liquid;chronic fatigue;rat model;experiment study

三勒漿抗疲勞液為國(guó)內(nèi)抗疲勞產(chǎn)品中的知名品牌，在長(zhǎng)期的臨床運(yùn)用中，顯示出較好的療效，為進(jìn)一步探討該產(chǎn)品抗慢性疲勞的作用機(jī)理，我們進(jìn)行了動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的初步研究。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 動(dòng)物 SD大鼠，體重160～180g，雌雄各半，共50只，合格證號(hào)：SCXK（川）2004-11，供應(yīng)單位：成都中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物供應(yīng)中心。

1.2 供試品 三勒漿抗疲勞液，0.5g生藥/ml，30ml/支，紅棕色液體，批號(hào)：Y20040702，人臨床用量及給藥途徑：30ml/次，1天1次，口服。供應(yīng)單位：成都三勒漿藥業(yè)集團(tuán)四川華美制藥有限公司。

1.3 主要實(shí)驗(yàn)儀器及試劑

1.3.1 大鼠游泳池 長(zhǎng)80cm，寬80cm，高80cm。

1.3.2 板式酶標(biāo)儀 型號(hào)：ZS-2，北京市新風(fēng)機(jī)電技術(shù)公司。

1.3.3 臺(tái)式高速冷凍離心機(jī) 型號(hào)：TGL―16G，上海安亭科學(xué)儀器廠。

1.3.4 大鼠IL-1b ELISA檢測(cè)試劑盒 批號(hào)：TCV5102-BS62031，規(guī)格：96T，BPB Biomedicals，Inc.大連泛邦公司提供。

1.3.5 大鼠IL-6 ELISA檢測(cè)試劑盒 批號(hào)：TCV5102-BS62031，規(guī)格：96T，BPB Biomedicals，Inc.大連泛邦公司提供。

1.3.6 大鼠5-HT ELISA檢測(cè)試劑盒 批號(hào)：TCV5102-BS62031，規(guī)格：96T，BPB Biomedicals，Inc.大連泛邦公司提供。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 動(dòng)物分組 經(jīng)檢疫合格后，將50只大鼠計(jì)算機(jī)完全隨機(jī)分成5組，每組10只，分別為低、中、高三勒漿抗疲勞液組、模型對(duì)照組及空白對(duì)照組。分籠飼養(yǎng)，每籠動(dòng)物5只。正式試驗(yàn)前，各組動(dòng)物適應(yīng)性飼養(yǎng)7天。

2.2 劑量設(shè)置及給藥 按體表面積折算，大鼠用量為1.5g生藥/kg；以此為低劑量，各組設(shè)置如下：低劑量組：1.5g生藥/kg；中劑量組：3g生藥/kg；高劑量組：6g生藥/kg，空白對(duì)照組及模型對(duì)照組灌服等體積純水。

2.3 慢性疲勞動(dòng)物模型的建立 大鼠從第8天起，除空白對(duì)照組外，其他各組動(dòng)物開始接受23天不同的應(yīng)激性刺激，即單日冷水［(21±1)℃，水深50cm］游泳，每次30min；雙日束縛應(yīng)激［1］，用膠布束縛鼠四肢，每次3h，每天1次。造模同時(shí)，給藥組動(dòng)物灌胃對(duì)應(yīng)劑量的供試品連續(xù)23天，每天1次，空白對(duì)照組灌胃相同體積的生理鹽水。

2.4 觀察指標(biāo)

2.4.1 一般情況觀察 造模期間，每天觀察并記錄鼠的飲水量、進(jìn)食量、體重及鼠毛色澤等一般情況。

2.4.2 動(dòng)物行為學(xué)觀察

2.4.2.1 鼠尾懸掛實(shí)驗(yàn) 測(cè)定情緒反應(yīng)及體力情況。距大鼠尾端1cm的部分穿過(guò)中央鉆有直徑1cm孔的有機(jī)玻璃板，板離地面1 m左右，使大鼠呈倒掛狀。懸掛兩側(cè)用板隔開動(dòng)物視線，大鼠為克服不正常的而掙扎活動(dòng)，但活動(dòng)一定時(shí)間后，出現(xiàn)間斷性“不動(dòng)”，顯示“失望”狀態(tài)。觀察6min內(nèi)的掙扎次數(shù)(大鼠由倒掛向上翻轉(zhuǎn)的總次數(shù))及不動(dòng)時(shí)間(大鼠處于完全靜止不動(dòng)狀態(tài)的總時(shí)間)。

2.4.2.2 力竭游泳實(shí)驗(yàn) 測(cè)定情緒反應(yīng)及體力情況。游泳時(shí)水深為50cm、水溫(28±1)℃。游泳前16h大鼠禁食不禁飲。灌胃給藥30min后，將標(biāo)記好的大鼠同時(shí)置入游泳池，記錄大鼠從入水到游泳至力竭(頭部沉入水中10秒中不能浮出水面為力竭標(biāo)準(zhǔn))的時(shí)間。

2.4.3 對(duì)細(xì)胞因子白細(xì)胞介素-1b(IL-1b)、白細(xì)胞介素-6(IL-6)及神經(jīng)遞質(zhì)五羥色胺（5-HT）的影響

2.4.3.1 血清標(biāo)本的采集 采用腹主動(dòng)脈采血法，收集大鼠血液4ml，靜置2h，3000rpm離心，分離血清，取上清液為待檢測(cè)樣品。按照試劑盒要求檢測(cè)樣品IL-1b、IL-6和5-HT含量，于酶標(biāo)儀450nm處測(cè)OD值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并查出各樣品中相應(yīng)的含量。

2.4.3.2 對(duì)血漿、腦組織中5-HT活性的影響 檢測(cè)標(biāo)本的采集：各組動(dòng)物取血后，斷頭處死，迅速取出下丘腦和垂體組織，電子天平稱重后，以1：30（W/V）的比例加入BPS，立即貯存于-20℃冰箱保存，待測(cè)。檢測(cè)時(shí)，將腦組織在冰浴條件下勻漿，低溫離心機(jī)3500rpm離心10min，取上清液進(jìn)行檢測(cè)。

按照5-HT試劑盒要求檢測(cè)，于酶標(biāo)儀450nm處測(cè)OD值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并查出各樣品中相應(yīng)的含量。

2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 以統(tǒng)計(jì)軟件SPSS11.0單因素方差分析進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 一般情況研究結(jié)果 結(jié)果見表1～3?；\旁觀察，模型組大鼠較其他組動(dòng)物的活動(dòng)量明顯下降，對(duì)外界刺激反應(yīng)不敏感，遲鈍。從大鼠一般情況的數(shù)據(jù)分析來(lái)看，慢性疲勞造模組大鼠在飲水量、飲食量及體重等多方面均有較明顯的下降的趨勢(shì)，其中飲食及體重方面與空白對(duì)照組比較差異有顯著性；三勒漿抗疲勞液給藥組大鼠與模型對(duì)照組比較，總體情況有改善的趨勢(shì)，其中飲水量與模型對(duì)照組比較差異有顯著性，其他兩項(xiàng)指標(biāo)均值亦明顯高于模型對(duì)照組，但與模型對(duì)照組及空白對(duì)照組比較差異無(wú)顯著性，說(shuō)明三勒漿抗疲勞液在改善慢性疲勞動(dòng)物模型的一般情況方面具有一定的作用。

3.2 一般行為學(xué)研究

3.2.1 大鼠尾部懸掛試驗(yàn) 結(jié)果見表4。從數(shù)據(jù)分析可以看出慢性疲勞模型組大鼠掙扎次數(shù)與空白對(duì)照組比較差異有非常顯著性（P＜0.01）；與低劑量給藥組比較差異有顯著性（P＜0.05）；各組與空白對(duì)照組比較均差異有非常顯著性；從大鼠不動(dòng)時(shí)間的分析數(shù)據(jù)中可以看出模型大鼠不動(dòng)時(shí)間均值長(zhǎng)于其他各組動(dòng)物，與三勒漿中劑量組比較差異有顯著性（P＜0.05），但與空白對(duì)照組比較差異無(wú)顯著性。

3.2.2 大鼠力竭游泳試驗(yàn) 結(jié)果見表5。從試驗(yàn)結(jié)果分析，未經(jīng)游泳造模訓(xùn)練的空白組大鼠力竭游泳時(shí)間明顯短于其他各組（P＜0.01）。給藥組大鼠力竭游泳時(shí)間均明顯長(zhǎng)于模型對(duì)照組，說(shuō)明三勒漿抗疲勞液具有對(duì)抗慢性疲勞的作用。表1 大鼠各組飲水量變化結(jié)果注：Δ造模結(jié)束前1天死亡3只大鼠。采用SPSS11.0 One-way ANOVA-LSD分析。與模型對(duì)照組比較，**P＜0.01表2 大鼠各組飲食量變化結(jié)果注：Δ造模結(jié)束前1天死亡3只大鼠。采用SPSS11.0 One-way ANOVA-LSD分析。與模型對(duì)照組比較，*P＜0.05表3 大鼠各組體重變化結(jié)果注：采用SPSS11.0 One-way ANOVA-LSD分析。與模型對(duì)照組比較，**P＜0.01表4 大鼠尾部懸掛試驗(yàn)結(jié)果注：采用SPSS11.0 One-way ANOVA-LSD分析。與模型對(duì)照組比較，*P＜0.05；與模型對(duì)照組比較，**P＜0.01；與空白對(duì)照組比較，P＜0.01表5 大鼠力竭游泳試驗(yàn)結(jié)果注：Δ試驗(yàn)測(cè)試前死亡2只大鼠。采用SPSS11.0 One-way ANOVA-LSD分析。中、高劑量組大鼠力竭游泳時(shí)間超過(guò)5400s(90min)后，未繼續(xù)記錄觀察，故均值以大于表示。與模型對(duì)照組比較，*P＜0.05；表示與模型對(duì)照組比較，**P＜0.01；表示與空白對(duì)照組比較，P＜0.01

3.3 大鼠血清IL-1b檢測(cè) 試驗(yàn)結(jié)果見表6?？瞻讓?duì)照組及中劑量給藥組與模型對(duì)照組比較差異有非常顯著性（P＜0.01）；高劑量組與模型對(duì)照組比較差異有顯著性（P＜0.05）。表6 大鼠血清IL-1b檢測(cè)結(jié)果 注：Δ有1份樣品出現(xiàn)溶血。采用SPSS11.0 One-way ANOVA-LSD分析。與模型對(duì)照組比較，*P＜0.05；與模型對(duì)照組比較，**P＜0.01

3.4 大鼠血清IL-6檢測(cè) 結(jié)果見表7。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，空白對(duì)照組與模型組比較差異有非常顯著性（P＜0.01）。各劑量給藥組大鼠血清中IL-6含量有上調(diào)的趨勢(shì)，但與模型對(duì)照組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。表7 大鼠血清IL-6檢測(cè)結(jié)果注：采用SPSS11.0 One-way ANOVA-LSD分析。與模型對(duì)照組比較，**P＜0.01

3.5 大鼠血清5-HT檢測(cè) 結(jié)果見表8。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，各組間比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。表8 大鼠血清5-HT檢測(cè)結(jié)果注：采用SPSS11.0 One-way ANOVA-LSD分析；各組間差異無(wú)顯著性

3.6 大鼠下丘腦、垂體5-HT檢測(cè) 結(jié)果見表9?？瞻讓?duì)照組、低劑量組及中劑量組與模型組比較，差異有非常顯著性（P＜0.01）；高劑量組與模型組比較差異有顯著性（P＜0.05）。模型對(duì)照組大鼠下丘腦及垂體中5-HT含量明顯低于其他各組動(dòng)物。表9 大鼠垂體、下丘腦中5-HT檢測(cè)結(jié)果 注：采用SPSS11.0 One-way ANOVA-LSD分析。與模型對(duì)照組比較，*P＜0.05；**P＜0.01

4 討論

中醫(yī)學(xué)認(rèn)為慢性疲勞是一種涉及多臟腑、多系統(tǒng)功能失調(diào)的疾病，與氣機(jī)失調(diào)關(guān)系密切，其發(fā)病多與情志不遂、勞逸、外邪有關(guān)［2］。而西醫(yī)學(xué)認(rèn)為應(yīng)激是導(dǎo)致或誘發(fā)慢性疲勞的重要因素。其中又以長(zhǎng)期的慢性應(yīng)激較急性應(yīng)激更為多見。本試驗(yàn)造模原理符合中、西醫(yī)學(xué)對(duì)慢性疲勞的認(rèn)識(shí)。本次實(shí)驗(yàn)，采用大鼠慢性應(yīng)激（反復(fù)應(yīng)激性刺激維持3周）的方法［1］，擬制造慢性疲勞大鼠模型。通過(guò)對(duì)大鼠一般情況的觀察，造模組與空白對(duì)照組之間存在明顯的差異：模型動(dòng)物活動(dòng)量、飲水量、飲食量及體重明顯低于空白對(duì)照組，說(shuō)明慢性應(yīng)激已影響大鼠的生理機(jī)能，符合慢性疲勞大鼠機(jī)體整體的變化規(guī)律，為慢性疲勞大鼠模型的形成奠定了客觀的基礎(chǔ)。而大鼠因體重、飲食量的下降也是間接導(dǎo)致動(dòng)物的體力及抗疲勞能力下降的重要因素之一。三勒漿抗疲勞液給藥組大鼠對(duì)以上各指標(biāo)與模型對(duì)照組大鼠比較均有一定的改善趨勢(shì)，提示三勒漿抗疲勞液能改善造模大鼠的機(jī)體狀況，對(duì)抗因慢性應(yīng)激而造成的機(jī)體一般情況的下降。

動(dòng)物行為學(xué)研究中，鼠尾懸掛試驗(yàn)，模型組大鼠表現(xiàn)出明顯的疲勞及抑郁狀態(tài)，其掙扎次數(shù)明顯低于空白對(duì)照組，不動(dòng)時(shí)間也有明顯延長(zhǎng)的趨勢(shì)。說(shuō)明造模組大鼠已處于體力及精神的疲勞狀態(tài)，對(duì)存在的刺激反應(yīng)程度下降，進(jìn)而產(chǎn)生一種抑郁狀態(tài)。而灌胃三勒漿抗疲勞液的造模大鼠，上述各指標(biāo)均有所改善，有明顯對(duì)抗慢性疲勞及抑郁狀態(tài)的作用。力竭游泳試驗(yàn)是考察動(dòng)物體力一個(gè)經(jīng)典試驗(yàn)，但試驗(yàn)本身受影響的因素較多，特別是動(dòng)物自身狀態(tài)直接影響試驗(yàn)結(jié)果。本研究過(guò)程中，發(fā)現(xiàn)所有造模動(dòng)物在最初的游泳訓(xùn)練中，其游泳能力均相對(duì)較弱（多數(shù)動(dòng)物游泳時(shí)間不超過(guò)20～30min），但經(jīng)3周時(shí)間的訓(xùn)練后，游泳能力顯著增強(qiáng)，這也導(dǎo)致未經(jīng)訓(xùn)練的空白組大鼠在最終的力竭游泳時(shí)間的測(cè)定過(guò)程中，明顯低于其他各組，而影響了試驗(yàn)的判斷。這種現(xiàn)象可能與伴隨大鼠對(duì)游泳環(huán)境的逐漸熟悉，對(duì)水溫、訓(xùn)練規(guī)律的了解，以及抑郁情緒的強(qiáng)化，入水后大鼠的緊張?bào)@恐情緒及游泳動(dòng)作幅度（單位時(shí)間的體力消耗量）均明顯的低于空白對(duì)照組，造成與空白對(duì)照組的不可比性。但在所有造模大鼠相同的試驗(yàn)條件下，造模組的游泳能力仍不及三勒漿抗疲勞液組（P＜0.05），提示大鼠各劑量組灌胃三勒漿抗疲勞液后，體力均能得到較好的恢復(fù)，進(jìn)一步明確了其抗疲勞的作用。

在大鼠血清IL-1b、IL-6的測(cè)定結(jié)果中，本次實(shí)驗(yàn)條件下，研究結(jié)果與有關(guān)試驗(yàn)結(jié)論有一定的差異［3］，模型對(duì)照組血清中IL-1b、IL-6含量均低于空白對(duì)照組。張有志［4］在觀察柴地合方對(duì)慢性應(yīng)激抑郁模型大鼠多種免疫功能影響時(shí)，取脾臟進(jìn)行淋巴細(xì)胞體外培養(yǎng)，以放射免疫法測(cè)定淋巴細(xì)胞的IL-1b和IL-6分泌水平， 結(jié)果IL-1b和IL-6分泌水平降低。孫開宏［5］在觀察中小負(fù)荷運(yùn)動(dòng)對(duì)心理應(yīng)激大鼠血清IL-1b含量的影響時(shí)，發(fā)現(xiàn)慢性心理應(yīng)激后，大鼠血清中IL-1b水平顯著低于對(duì)照組，而經(jīng)不同強(qiáng)度的運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練后，IL-1b水平顯著升高。說(shuō)明運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練可以降低心理應(yīng)激反應(yīng)程度。

本次試驗(yàn)采用30min/天游泳和3h/天捆綁的間隔應(yīng)激性刺激方法，其中游泳主要目的是造成大鼠的體力和精神疲勞，而捆綁主要是給予心理上的應(yīng)激性疲勞。從本次試驗(yàn)研究似乎可以看出，該種造模方法對(duì)大鼠的心理應(yīng)激反應(yīng)的表現(xiàn)更為明顯，這可能與大鼠在3周的時(shí)間內(nèi)逐漸適應(yīng)隔天1次的游泳（體力疲勞為主）訓(xùn)練有關(guān)。而經(jīng)灌胃三勒漿抗疲勞液后，大鼠血清IL-1b水平明顯升高（中、高劑量組與模型對(duì)照組比較差異有顯著性）；IL-6血清水平亦有提升趨勢(shì)。由此可見，促進(jìn)IL-1b和IL-6在心理應(yīng)激反應(yīng)環(huán)境條件下的提升，可能成為三勒漿抗疲勞液對(duì)抗癥狀性腦疲勞的一個(gè)重要實(shí)驗(yàn)研究依據(jù)。

在對(duì)血清和腦組織5-HT含量測(cè)定分析中，發(fā)現(xiàn)血清5-HT含量各組間無(wú)明顯的差異，說(shuō)明該造模條件下，對(duì)血清5-HT的影響不敏感。而對(duì)下丘腦及垂體組織勻漿上清液中5-HT含量測(cè)定發(fā)現(xiàn)模型組5-HT明顯低于其他各組。5-HT是調(diào)節(jié)機(jī)體精神活動(dòng)的一種重要神經(jīng)遞質(zhì)，該模型5-HT的下降似乎更符合經(jīng)典的抑郁癥發(fā)病的5-HT能與腎上腺素（NE）能神經(jīng)低下學(xué)說(shuō)［6］，與心理應(yīng)激所造成的機(jī)體癥狀性疲勞相關(guān)。而三勒漿抗疲勞液對(duì)5-HT的上調(diào)作用，似乎再次證明其對(duì)癥狀性腦疲勞的藥理學(xué)作用。

【參考文獻(xiàn)】

1 劉雁峰，王天芳，楊維益，等．慢性疲勞的中醫(yī)病理機(jī)制探討及實(shí)驗(yàn)研究一復(fù)合應(yīng)激因素致慢性疲勞動(dòng)物模型的研制及其行為學(xué)觀察．中國(guó)中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志，1998，4(增刊)：157.

2 李峰，楊維益，梁嶸，等．從中醫(yī)學(xué)看肝臟調(diào)節(jié)應(yīng)激反應(yīng)的作用．北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，1998，21(1)：20-22.

3 孟宏，姜亨圭，圖婭，等. 電針“四關(guān)”穴對(duì)慢性應(yīng)激致慢性疲勞大鼠細(xì)胞因子的影響. 中醫(yī)藥學(xué)刊，2003，21(9):1525-1527.

4 張有志，聶惠民，胡愉，等. 柴地合方對(duì)慢性應(yīng)激抑郁模型大鼠免疫功能的影響. 中國(guó)中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志，2004，10(9)：43-46.

篇3

【關(guān)鍵詞】（-）表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯（EGCG）；自然衰老大鼠；阿爾茨海默病（AD）；抗氧化

阿爾茨海默?。ˋD）是一個(gè)漸進(jìn)性神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病，已成為繼心血管疾病、癌癥、中風(fēng)之后的第四大死亡原因。其最典型的病理性改變是的神經(jīng)細(xì)胞間出現(xiàn)大量以β-淀粉樣肽為核心的老年斑、神經(jīng)元的胞體中出現(xiàn)神經(jīng)原纖維纏結(jié)及神經(jīng)元丟失和膠質(zhì)增生等。AD的發(fā)病機(jī)制目前尚未完全闡明，但自由基損傷學(xué)說(shuō)和細(xì)胞凋亡學(xué)說(shuō)備受人們的關(guān)注。自由基形成和氧化應(yīng)激增強(qiáng)，進(jìn)一步引起神經(jīng)細(xì)胞凋亡，是導(dǎo)致AD的功能退化和神經(jīng)變性的基礎(chǔ)。AD模型鼠腦中MDA水平較對(duì)照組顯著升高，高水平的MDA表達(dá)經(jīng)常與神經(jīng)元纖維纏結(jié)及老年斑相伴隨出現(xiàn)。并且臨床研究表明，阿爾茨海默病患者血清中SOD和GSH-Px活性明顯降低，而這兩種酶是人體內(nèi)在抗氧化方面有著重要作用。（-）表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯是綠茶的一種主要多酚成分，許多研究已經(jīng)揭示了EGCG的生物活性與其抗氧化特性緊密相關(guān)。為探討觀察綠茶提取物（-）表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯（EGCG）對(duì)自然衰老大鼠模型學(xué)習(xí)記憶障礙的改善作用，并初步探討其作用機(jī)制，本實(shí)驗(yàn)選用22～24月齡SD大鼠，應(yīng)用自然衰老大鼠篩選法制作AD模型，以EGCG灌胃給藥進(jìn)行治療，利用行為學(xué)實(shí)驗(yàn)及化學(xué)比色法觀察EGCG對(duì)衰老AD鼠的治療作用，并進(jìn)一步探討其抗氧化的作用的可能機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 主要儀器設(shè)備

TU-1810紫外可見分光光度計(jì)為北京普析通用儀器有限責(zé)任公司產(chǎn)品；Morris水迷宮裝置購(gòu)自北京碩林苑生物科技有限公司；生物研究顯微鏡購(gòu)自日本尼康科技有限公司。

1.1.2 主要試劑

EGCG，純度>95%，購(gòu)自Sigma公司；超敏SP濃縮（鼠/兔）試劑盒，產(chǎn)品編號(hào)KIT-0310，購(gòu)自北京中杉金橋有限公司；辣根酶標(biāo)記山羊抗兔IgG（H+L），產(chǎn)品編號(hào)ZB-2301，購(gòu)自北京中杉金橋有限公司；超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-px）、丙二醛（MDA）含量測(cè)定試劑盒均購(gòu)自南京建成生物試劑有限公司。

1.1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型的分組及給藥

將造模成功的AD大鼠按各鼠平均逃避潛伏期的長(zhǎng)短排序，根據(jù)隨機(jī)數(shù)字表隨機(jī)分為：模型組、EGCG治療組，每組11只，共2組；將5～6個(gè)月青年大鼠根據(jù)隨機(jī)數(shù)字表隨機(jī)抽取11只，作為對(duì)照組。水迷宮測(cè)試結(jié)束后即開始對(duì)入組動(dòng)物進(jìn)行灌胃給藥，EGCE治療組按照2mg/Kg.d的劑量灌胃給予EGCG；模型組和對(duì)照組給予等量蒸餾水灌胃。各組每天給藥1次，連續(xù)給藥30天

1.2 行為學(xué)觀察

水迷宮試驗(yàn)：

參照Morris方法進(jìn)行。從灌胃第24天進(jìn)行水迷宮實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)訓(xùn)練階段連續(xù)進(jìn)行2天，每天訓(xùn)練2次。第24天開始記錄數(shù)據(jù)，標(biāo)記為數(shù)據(jù)表中的第1天，共4天。

1.3 海馬內(nèi)SOD、GSH-Px酶活性及MDA含量的測(cè)定

行為學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，將各組大鼠每組取6只，斷頭處死，冰上快速取海馬，入液氮及-80℃中凍存。檢測(cè)時(shí)將海馬加入預(yù)冷的生理鹽水制成10%的腦勻漿，2000rpm/min離心10min，取上清。腦組織SOD、GSH-PX活性及MDA含量的測(cè)定，具體操作均按試劑盒說(shuō)明進(jìn)行。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

應(yīng)用spss16.0版本軟件包統(tǒng)計(jì)軟件，進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析。數(shù)據(jù)以均值加減標(biāo)準(zhǔn)差（■±s）表示。組間比較采用方差分析采用ANOVA、Mauchy’s Test of Sphercity、LSD’s post hoc test進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，以P

2 結(jié)果分析

在定位巡航試驗(yàn)中，模型組大鼠的尋找平臺(tái)的潛伏期較對(duì)照組大鼠明顯延長(zhǎng)（P

3 討論

理想的動(dòng)物模型的建立是研究AD的基礎(chǔ)。迄今為止，建立AD動(dòng)物模型的方法很多，其中AD自然衰老模型鼠國(guó)外一些實(shí)驗(yàn)室廣泛用于衰老和AD發(fā)病機(jī)制及藥物開發(fā)的研究。AD是一種年齡相關(guān)疾病，衰老因素在AD發(fā)病過(guò)程中扮演著重要角色，衰老所特有的病理生理變化及其它病變的影響，是用年輕動(dòng)物制作的動(dòng)物模型所不能替代的，選擇帶有認(rèn)知和記憶嚴(yán)重缺失的個(gè)體，其病理行為表現(xiàn)與老年人和AD患者的認(rèn)知損害相類似，同時(shí)還可出現(xiàn)某些相應(yīng)的腦組織病理改變。該模型的特點(diǎn)是自然衰老，其神經(jīng)系統(tǒng)的損害亦屬自然發(fā)生。由于AD的發(fā)病機(jī)制未明，目前所用的藥物造模和基因敲除造模方法制造的AD模型不能完全代表AD疾病的所有特點(diǎn)，而自然衰老的大鼠是通過(guò)一定標(biāo)準(zhǔn)的篩選制造的模型，就如同自然發(fā)病的AD患者，能夠較全面的代表AD疾病的特點(diǎn)。而且AD本身是一種老年疾病，目前藥物造模或基因敲除的老鼠多為青壯年，在神經(jīng)系統(tǒng)、行為認(rèn)知方面也許可以模擬AD的特點(diǎn)，但是從總體研究的角度來(lái)說(shuō)，不如自然衰老模型的大鼠更具有代表性?？傊珹D衰老模型鼠模型成功的模擬了AD的行為學(xué)及病理學(xué)改變，可用于AD的藥物治療研究。

篇4

【關(guān)鍵詞】神經(jīng)病理性疼痛；坐骨神經(jīng)慢性壓迫模型；坐骨神經(jīng)部分損傷模型

【中圖分類號(hào)】R-332 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A 【文章編號(hào)】1004-7484（2012）13-0022-01

神經(jīng)病理性疼痛即通常所指的慢性持續(xù)性疼痛，其發(fā)病機(jī)制目前尚未完全清楚。選擇一個(gè)較為理想的疼痛模型對(duì)該病的基礎(chǔ)研究尤為重要，目前常用的周圍神經(jīng)損傷疼痛模型有坐骨神經(jīng)慢性壓迫模型（CCI）和坐骨神經(jīng)部分損傷模型（PSI）。本實(shí)驗(yàn)旨在對(duì)兩種模型的行為學(xué)變化和痛閾變化進(jìn)行檢測(cè)對(duì)比，為對(duì)神經(jīng)病理性疼痛的研究中的模型選擇做參考。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組與制作

30只SD大鼠（漯河醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心），雄性，體重250～300 g，隨機(jī)分為3個(gè)組。

①坐骨神經(jīng)慢性壓迫模型組（CCI組）：10只，制作方法如下[1]：腹腔注射10%水合氯醛（3 ml/kg）麻醉，取俯臥位，聚維酮碘溶液消毒左、右側(cè)大腿皮膚，切開皮膚，鈍性分離股二頭肌，暴露出坐骨神經(jīng)干，用非吸收外科縫線環(huán)繞神經(jīng)干分別做4個(gè)輕度結(jié)扎環(huán)，間距1～2 mm，結(jié)扎強(qiáng)度以引起小腿肌肉輕度顫動(dòng)反應(yīng)為宜，術(shù)后用絲線逐層縫合切口。

②坐骨神經(jīng)部分損傷模型（PSI）：10只，左右肢暴露坐骨神經(jīng)干以后用玻璃鈍性組織分離器將坐骨神經(jīng)干縱向分開，緊緊結(jié)扎1/3～1/2的神經(jīng)干。其余方法同CCI組。

③假手術(shù)組（Sham組）：10只，僅左右肢暴露坐骨神經(jīng)干不予結(jié)扎，其余方法同CCI組。

1.2 疼痛行為學(xué)及痛閾測(cè)定

用Von Frey纖毛測(cè)定大鼠的機(jī)械縮足反射閾值（mechanical withdrawal threshold， MWT）和熱痛刺激儀測(cè)定大鼠熱刺激縮足反射潛伏期（paw withdrawal thermal latency， PWTL）分別評(píng)價(jià)大鼠機(jī)械痛敏和熱痛敏。所有各組大鼠均在手術(shù)前1 d測(cè)定MWT、PWTL值，術(shù)后1、3、7、14、28、56 d分別測(cè)定MWT、PWTL值，測(cè)量前觀察添足、咬足等行為。每次測(cè)量均在上午進(jìn)行。（1）MWT測(cè)定方法：采用von Frey絲測(cè)定雙后肢機(jī)械痛閾，將大鼠置于金屬籠中適應(yīng)環(huán)境30 min，用不同壓力纖維絲刺激足底2、3趾間皮膚，每根重復(fù)5次，每次間隔5s，直至找到出現(xiàn)50%（10次）抬足反應(yīng)的纖維絲，其壓力值（出現(xiàn)大于5次以上是縮足反應(yīng)），即為閾值，左右輪流測(cè)試，每足測(cè)量5次，取平均值。（2）PWTL測(cè)量方法：利用鼠爪熱輻射刺激測(cè)痛儀。大鼠出于自由活動(dòng)狀態(tài)，調(diào)整好一起刺激強(qiáng)度（R=72），將刺激裝置放置在鼠爪下，按操作鍵，當(dāng)鼠爪移動(dòng)時(shí)系統(tǒng)自動(dòng)記錄大鼠反應(yīng)時(shí)間，此時(shí)間即為大鼠足底PWTL，每足測(cè)量5次，時(shí)間間隔3～5 min，取平均值。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 13.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，組內(nèi)比較采用配對(duì)資料t檢驗(yàn)，組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 行為學(xué)觀察

三組大鼠術(shù)后7天內(nèi)均出現(xiàn)舔舐傷口行為，CCI組和PSI組大鼠術(shù)后出現(xiàn)添足、咬足、垂足、腳趾并攏，屈曲等行為。

2.2 PWTL和MWT值檢測(cè)

三組術(shù)前PWTL和MWT值檢測(cè)無(wú)差異（P >0.05），術(shù)后1～28d CCI組和PSI組PWTL和MWT值較Sham組明顯降低，其中CCI組更為明顯（P 0.05，表1），而PSI組術(shù)后56d PWTL和MWT值與Sham組比較仍明顯降低（P

3 討論

神經(jīng)病理性疼痛給病人造成了極大的痛苦，目前其發(fā)病機(jī)制尚不完全清楚。理想的疼痛模型對(duì)研究該病的發(fā)病機(jī)制尤為重要。神經(jīng)病理性疼痛模型可分為中樞神經(jīng)損傷模型和周圍神經(jīng)損傷模型。中樞神經(jīng)損傷模型如腰髓損傷等因會(huì)導(dǎo)致高位截癱和壞死[2]目前已經(jīng)極少應(yīng)用。周圍神經(jīng)損傷模型針對(duì)脊神經(jīng)如坐骨神經(jīng)等進(jìn)行損傷和壓迫因可以較大程度的產(chǎn)生持續(xù)性疼痛[3]而得到廣泛應(yīng)用。目前常用的周圍神經(jīng)損傷模型有坐骨神經(jīng)慢性壓迫模型（CCI）和坐骨神經(jīng)部分損傷模型（PSI）。

坐骨神經(jīng)慢性壓迫模型由Bennett和Xie[4]于1988年首次報(bào)道，該模型可以較好的模仿臨床的腫瘤壓迫、神經(jīng)損傷、重金屬中毒等產(chǎn)生的神經(jīng)病理性疼痛而被廣泛應(yīng)用，且手術(shù)方法簡(jiǎn)單，易于操作。但由于該模型的疼痛效果受打結(jié)強(qiáng)度的影響較大，個(gè)體之間存在較大差異，為解決這個(gè)問(wèn)題出現(xiàn)了PSI模型。PSI模型由Seltzer首次報(bào)道[5]。該模型對(duì)部分坐骨神經(jīng)進(jìn)行鈍性分離并深度結(jié)扎，產(chǎn)生持續(xù)性的慢性疼痛，可以有效解決個(gè)體之間的差異問(wèn)題，但操作復(fù)雜，易于污染，手術(shù)創(chuàng)傷較大，不利于大量制作。

本實(shí)驗(yàn)旨在對(duì)兩種模型的疼痛效果進(jìn)行對(duì)比，對(duì)疼痛的持續(xù)性和痛閾的敏感程度進(jìn)行對(duì)比。實(shí)驗(yàn)顯示，兩種模型均能產(chǎn)生持續(xù)有效的疼痛。在持續(xù)時(shí)間上CCI模型在56d后PWTL和MWT值已基本恢復(fù)，與對(duì)照組比較無(wú)差異，說(shuō)明疼痛已基本消失，而PSI模型在56d后PWTL和MWT值與對(duì)照組比較仍具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，說(shuō)明PSI模型可產(chǎn)生更為持久的疼痛。在對(duì)疼痛的敏感程度上，CCI組PWTL和MWT值在術(shù)后1～28d比PSI組更低，且較快的達(dá)到最低值，說(shuō)明CCI模型比PSI模型對(duì)疼痛更為敏感，可快速達(dá)到神經(jīng)病理性疼痛效果。

總之，CCI模型和PSI模型均可產(chǎn)生持續(xù)性的慢性疼痛，CCI模型對(duì)疼痛更為敏感，而PSI模型的疼痛持續(xù)時(shí)間較長(zhǎng)，在進(jìn)行神經(jīng)病理性疼痛研究時(shí)可根據(jù)需要選擇適當(dāng)?shù)奶弁茨Ｐ汀?/p>

參考文獻(xiàn)

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篇5

【Abstract】 AIM: To study whether the blockade of glutamate NMDA receptors in the ventral tegmental area (VTA) modulates the morphine withdrawal in rats. METHODS: The effects of (+) MK801， microinjected unilaterally into the VTA 30 min before naloxone (2 mg/kg， ip) administration， on the morphine withdrawal were assessed. Morphine dependence developed with increasing morphine injection (ip) and morphine withdrawal was induced by injection (ip) of naloxone (2 mg/kg). Wet dog shakes and GellertHoltzman score were used as the indexes to evaluate the intensity of morphine withdrawal. RESULTS: Unilateral microinjection of MK801 into the VTA significantly reduced the GellertHoltzman score and the incidence of wet dog shakes in morphine withdrawal rats. CONCLUSION: MK801 (2， 5， 10 g/L) unilaterally administered into the VTA significantly reduces the intensity of morphine withdrawal syndrome in dependent rats. These data support that glutamatergic transmission in the VTA and its interactions with dopaminergic neurons in the mesolimbic system play some important roles in opiate withdrawal syndrome. Our findings also suggest a potential use of NMDA antagonists in the therapeutic treatment of opiate abuse.

【Keywords】 MK801; Morphine deperdence; substance withdrawal syndrome; receptors， NmethylDaspartate; Rats; ventral tegmental area

【摘要】 目的： 研究中腦―邊緣多巴胺回路腹側(cè)被蓋區(qū)(VTA)內(nèi)源性谷氨酸信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)在嗎啡戒斷形成中的作用. 方法： 給VTA微注射不同劑量谷氨酸NMDA受體拮抗劑（+）MK801，用行為學(xué)方法觀察對(duì)嗎啡戒斷大鼠戒斷癥狀的影響. 遞增量嗎啡ip 7 d建立依賴模型，末次給藥1.5 h ip鹽酸納洛酮（2 mg/kg）誘發(fā)戒斷癥狀，以GellertHoltzman Score和濕狗樣顫為評(píng)價(jià)戒斷癥狀程度的指標(biāo)，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析. 結(jié)果： （+）MK801（2， 5， 10 g/L）微注射于VTA可明顯減弱嗎啡戒斷大鼠濕狗樣顫的發(fā)生次數(shù)，且能顯著降低嗎啡戒斷鼠的GellertHoltzman Score. 結(jié)論： VTA內(nèi)源性谷氨酸受體及其與中腦―邊緣多巴胺能信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)相互作用，參與嗎啡戒斷的形成，提示谷氨酸受體拮抗劑可用于嗎啡戒斷的治療.

【關(guān)鍵詞】 腹側(cè)被蓋區(qū)；嗎啡依賴；物質(zhì)禁斷綜合征受體，N甲基D天冬氨酸；MK801；大鼠

0引言

阿片依賴是一種細(xì)胞適應(yīng)性反應(yīng)，許多腦區(qū)參與，中腦―邊緣多巴胺回路系其中之一. 研究表明嗎啡戒斷大鼠腹側(cè)被蓋區(qū)（VTA）多巴胺神經(jīng)元直徑、數(shù)目減?。?］，放電頻率及多巴胺釋放量降低［2，3］，可見VTA多巴胺神經(jīng)元功能下調(diào). VTA多巴胺能神經(jīng)元既接受自身受體D2的調(diào)節(jié)，又接受谷氨酸能投射. 激動(dòng)VTA谷氨酸受體可增加伏隔核多巴胺釋放和大鼠運(yùn)動(dòng)行為［4］，重復(fù)給予嗎啡等可增加VTA谷氨酸釋放和其受體亞基表達(dá)，可見VTA谷氨酸受體功能上調(diào). 但該回路谷氨酸受體在嗎啡戒斷形成中的作用說(shuō)法不一，因多數(shù)研究以全身或腦室內(nèi)給藥方式進(jìn)行. 我們?cè)趩岱纫蕾嚧笫笳T發(fā)戒斷前，微注射谷氨酸NMDA受體拮抗劑（+）MK801于VTA，觀察其對(duì)嗎啡戒斷癥狀的影響.

1對(duì)象和方法

1.1對(duì)象

SD雄性大鼠48只，體質(zhì)量(235±15) g（西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心）. 鹽酸納洛酮，（+）MK801（美國(guó)Sigma公司），鹽酸嗎啡粉劑（青海制藥廠，批號(hào)：010202），鹽酸嗎啡針劑（沈陽(yáng)制藥廠，批號(hào)：020907）.

1.2方法

1.2.1手術(shù)大鼠在戊巴比妥鈉麻醉下，行單側(cè)VTA套管埋植手術(shù)，套管埋植在距VTA背側(cè)2 mm處，用不銹鋼螺釘和牙科水泥固定在顱骨表面，VTA定位為AP -5.3 mm， ML +0.7 mm， DV -7.7 mm，手術(shù)過(guò)程用電熱毯保持大鼠體溫在(37±1) ℃，術(shù)后大鼠單籠喂養(yǎng)，且前3 d ip青霉素2000 u/d，術(shù)后7 d建立嗎啡依賴模型.

1.2.2制模按照文獻(xiàn)［5］的方法，首次劑量為10 mg/kg，分別在8：00和16：00各ip 1次，以后嗎啡劑量每日增加10 mg/kg，連續(xù)注射7 d，其中第6，7日劑量維持在50 mg/kg，建成嗎啡依賴模型. 末次給藥1 h后，經(jīng)套管VTA給予(+) MK801 (2， 5，10 g/L)或生理鹽水0.5 μL， 30 min后ip鹽酸納洛酮（2 mg/kg）誘發(fā)戒斷癥狀［6］，并立即放進(jìn)透明玻璃缸（50 cm×50 cm×60 cm）內(nèi)觀察大鼠戒斷癥狀1 h.

1.2.3實(shí)驗(yàn)分組將大鼠隨機(jī)分為6組，即第1（鹽水對(duì)照）組，第2（嗎啡依賴對(duì)照）組，第3（嗎啡戒斷對(duì)照）組，第4［（+）MK801小劑量治療］組，第5［（+）MK801中劑量治療］組和第6［（+）MK801大劑量治療］組. 每組8只.

1.2.4組織再建行為學(xué)觀察后，60 mg/kg戊巴比妥鈉ip麻醉大鼠，經(jīng)心灌注200 mL生理鹽水快速?zèng)_洗血液后，用40 g/L多聚甲醛固定液（0.1 mol/L PB配制，pH 7.4）400 mL灌流1 h，灌注后取腦，置入40 g/L多聚甲醛固定液4℃后固定12 h，再移入250 g/L蔗糖溶液固定24 h以上，按Paxinos大鼠立體定位圖譜在前囟后4.8～5.8 mm范圍內(nèi)用冰凍切片機(jī)連續(xù)冠狀切片，片厚50 μm，連續(xù)取片，收集于100 mL/L的乙醇溶液，5 g/L Cresyl violet染色［6］，確定給藥部位.

1.2.5行為學(xué)分析參考FernandezEspejo等［7］的行為學(xué)定義和評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)，戒斷癥狀的嚴(yán)重程度用10個(gè)指標(biāo)衡量，將其分為等級(jí)癥狀（依據(jù)出現(xiàn)次數(shù)的多少得分）和觀察癥狀（出現(xiàn)即得分）2類，并定義不同的分值，① 等級(jí)癥狀： 濕狗樣顫1～2次計(jì)2分，3次或更多計(jì)4分；后腿直立，跳躍或異常姿勢(shì)1～4次計(jì)1分，5～9次計(jì)2分，10次及10次以上計(jì)3分；體質(zhì)量喪失一個(gè)百分點(diǎn)計(jì)1分. ② 觀察癥狀： 腹瀉，眼瞼下垂或咬牙出現(xiàn)計(jì)2分；激惹或出現(xiàn)計(jì)3分. 累加各戒斷癥狀的得分，求得GellertHoltzman Score 評(píng)分.

統(tǒng)計(jì)學(xué)處理： GellertHoltzman Score評(píng)分以x±sx表示，所得數(shù)據(jù)采用Sigma Stat 2.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，應(yīng)用單因素方差分析進(jìn)行各組間比較，應(yīng)用Post hoc comparisons (NewmanKeuls) 進(jìn)行均數(shù)間兩兩比較檢驗(yàn)；濕狗樣震顫發(fā)生次數(shù)偏態(tài)分布，因此以中位數(shù)、25百分位數(shù)和75百分位數(shù)描述，采用Sigma Stat 2.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，應(yīng)用KruskalWallis法進(jìn)行多樣本間的秩和檢驗(yàn)，應(yīng)用MannWhitey U法進(jìn)行兩組間比較，以P

2結(jié)果

2.1組織再建Fig 1表明了各實(shí)驗(yàn)組VTA給藥的部位. 其中鹽水或(+)MK801注射在VTA范圍以外的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，在統(tǒng)計(jì)分析時(shí)已剔除.

2.2(+)MK801治療對(duì)嗎啡戒斷大鼠GellertHoltzman Score評(píng)分的影響各癥狀的累計(jì)GellertHoltzman Score評(píng)分應(yīng)用單因素方差分析（one way ANOVA）顯示6組間的評(píng)分差異顯著，Post hoc comparisons（NewmanKeuls）檢驗(yàn)顯示第3組的GellertHoltzman Score評(píng)分顯著高于其他5組（P

2.3MK801治療對(duì)嗎啡戒斷大鼠濕狗樣顫的影響濕狗樣顫系嗎啡戒斷大鼠的特征性行為，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中第1，2組均未出現(xiàn). 第3至6組大鼠均有濕狗樣顫發(fā)生，KruskalWallis法秩和檢驗(yàn)顯示各組間濕狗樣顫發(fā)生次數(shù)差異顯著，進(jìn)一步應(yīng)用MannWhitey U方法進(jìn)行兩樣本間比較，第3組顯著高于其他5組（P

3討論

VTA是多巴胺神經(jīng)元的集中區(qū)之一，主要起源于A8A10細(xì)胞群，該區(qū)的多巴胺神經(jīng)元同時(shí)接受抑制性GABA能和興奮性谷氨酸能纖維投射，前者的輸入減弱或后者的輸入增加均會(huì)導(dǎo)致VTA多巴胺神經(jīng)元興奮. 大量研究證實(shí)嗎啡依賴和戒斷的產(chǎn)生與中樞多巴胺能神經(jīng)元活動(dòng)密切相關(guān)，伏隔核［8］給予D1受體拮抗劑可誘發(fā)嗎啡依賴大鼠的戒斷癥狀，而全身給予D1受體激動(dòng)劑可減弱嗎啡戒斷癥狀，可見在嗎啡戒斷時(shí)中樞多巴胺能神經(jīng)元活動(dòng)減弱. VTA多巴胺神經(jīng)元主要投射NAcc和mPFC (medial prefrontal cortex)，同時(shí)也投射下丘腦和腦干，而下丘腦和mPFC又是自主神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)的核心，嗎啡戒斷引起的VTA多巴胺能神經(jīng)元活動(dòng)下調(diào)進(jìn)而引起自主神經(jīng)系統(tǒng)功能加強(qiáng)，表現(xiàn)出戒斷行為，因此有人認(rèn)為多巴胺間接參與嗎啡戒斷行為的產(chǎn)生［9］；還有人認(rèn)為嗎啡戒斷時(shí)運(yùn)動(dòng)增強(qiáng)直接由VTA多巴胺D2受體引起［10］. 近期的研究表明嗎啡戒斷大鼠中腦邊緣多巴胺回路谷氨酸能神經(jīng)元活動(dòng)加強(qiáng)［11，12］，表現(xiàn)為該回路谷氨酸釋放量增加，谷氨酸受體亞基GluR1，NMDAR1 表達(dá)上調(diào)，全身給予AMPA或NMDA受體拮抗劑可減弱嗎啡戒斷癥狀，因此認(rèn)為在嗎啡戒斷時(shí)中腦―邊緣多巴胺回路通過(guò)谷氨酸能神經(jīng)元的活動(dòng)發(fā)揮作用.

嗎啡依賴模型建立時(shí)給予大劑量鹽酸嗎啡ip，且用2 mg/kg鹽酸納洛酮誘發(fā)戒斷行為，以大鼠特異和敏感的行為學(xué)指標(biāo)為參數(shù)，換算求得GellertHoltzman Score評(píng)分，整體衡量嗎啡戒斷大鼠戒斷癥狀的程度，同時(shí)以大鼠敏感而特異的濕狗樣顫發(fā)生次數(shù)為等級(jí)癥狀的代表，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理. 在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，嗎啡戒斷的特異行為如濕狗樣顫、跳躍、扭體，在嗎啡依賴對(duì)照組和鹽水對(duì)照組均未出現(xiàn)，可見實(shí)驗(yàn)所得數(shù)據(jù)可靠. 另外GellertHoltzman Score評(píng)分系GellertHoltzman 于1978年建立的一種經(jīng)典的阿片類物質(zhì)軀體戒斷評(píng)價(jià)指標(biāo)體系. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明VTA單側(cè)微注射（+）MK801能明顯減弱了嗎啡戒斷大鼠的GellertHoltzman Score 評(píng)分和濕狗樣顫的發(fā)生次數(shù)，但(+)MK801這一作用在3個(gè)不同劑量組間未表現(xiàn)出顯著的差異. VTA微注射（+）MK801拮抗了谷氨酸受體，從而降低VTA區(qū)多巴胺能活動(dòng)，可見VTA內(nèi)源性谷氨酸受體調(diào)節(jié)嗎啡戒斷行為的形成. 總之，微注射（+）MK801（2， 5， 10 g/L）于VTA顯著減弱嗎啡戒斷大鼠的GellertHoltzman Score評(píng)分和濕狗樣顫的發(fā)生次數(shù)，表明VTA內(nèi)源性谷氨酸受體，及其與中腦邊緣多巴胺能神經(jīng)元相互作用參與嗎啡戒斷形成，同時(shí)提示谷氨酸受體拮抗劑（+）MK801具有治療嗎啡戒斷和復(fù)吸作用.

參考文獻(xiàn)

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篇6

【摘要】 目的：觀察嗎啡依賴大鼠腦電、心電的改變。方法：用遞增法制備嗎啡依賴大鼠模型，自然戒斷，在清醒狀態(tài)下用RM6240系列多道生理信號(hào)采集處理系統(tǒng)記錄腦電和心電。結(jié)果：?jiǎn)岱纫蕾嚧笫驢R減慢，戒斷后恢復(fù)；給藥期α(8-14HZ)波較給藥前顯著增多，δ（1-4HZ）、θ（4-8HZ）、β（14-30HZ）與給藥前相比無(wú)顯著性差異；停藥后與給藥期相比δ波增加，α、θ波減少，但與給藥前比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。β波給藥前、給藥期、停藥后無(wú)明顯改變。結(jié)論：?jiǎn)岱纫蕾嚧笫蟮哪X電、心電均較給藥前明顯改變，戒斷后的腦電、心電與給藥前相比無(wú)顯著差異。

【關(guān)鍵詞】 腦電； 心電； 嗎啡依賴

1 前言

20世紀(jì)80年代以來(lái)，類藥物濫用現(xiàn)象在我國(guó)呈逐年增加的趨勢(shì)，已成為影響人們身心健康及家庭、社會(huì)安定的一大公害。目前國(guó)內(nèi)外對(duì)于藥物依賴大鼠動(dòng)物模型的觀察大都以行為學(xué)為指標(biāo)，而客觀的量化指標(biāo)少見報(bào)道。本研究以心電、腦電變化為指標(biāo)，通過(guò)信息處理系統(tǒng)進(jìn)行實(shí)時(shí)跟蹤觀察，探討藥物依賴動(dòng)物模型的客觀指標(biāo)，為藥物依賴的基礎(chǔ)研究與臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

2 材料與方法

2.1 動(dòng)物

采用Wistar大鼠，體重120～210g，雌雄不拘，由荊楚理工學(xué)院醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

2.2 儀器與藥品

RM6240系列多道生理信號(hào)采集處理系統(tǒng)(成都儀器廠生產(chǎn))；鹽酸嗎啡（沈陽(yáng)制藥廠生產(chǎn)）。

2.3 準(zhǔn)備

頭骨包埋電極：大鼠在烏拉坦麻醉狀態(tài)下，暴露頭骨，在頭骨矢狀縫左側(cè)，分別距前囟旁2mm，前2mm和旁2mm，后4mm處鉆孔，插入0.25mm口腔正畸用不銹鋼絲作為記錄電極，用502膠與牙托粉固定［1］，撒磺胺粉后縫合傷口。待手術(shù)創(chuàng)口完全愈合后進(jìn)行腦電記錄。

四肢用脫毛劑脫毛，采用標(biāo)準(zhǔn)Ⅰ導(dǎo)聯(lián)記錄心電圖。

2.4 實(shí)驗(yàn)分組與處理

選用120～210g，Wistar大鼠9只，雌雄不拘，隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組（6只）和對(duì)照組（3只）。兩組于給藥前3天同步記錄正常心電、腦電。實(shí)驗(yàn)組由腹部皮下注射鹽酸嗎啡溶液建立嗎啡依賴大鼠模型。模型的建立按照每天每公斤體重遞增給予不同劑量的嗎啡（20、40、60、80、100、120mg/kg），每天2次，共注射6d。對(duì)照組注射與實(shí)驗(yàn)組同體積的生理鹽水，給藥/生理鹽水后30min同步記錄腦電、心電。停藥后連續(xù)3天記錄心電，腦電。

2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

計(jì)算資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，組內(nèi)比較采用配對(duì)t檢驗(yàn)。

3 結(jié)果

3.1 對(duì)照組

在生理鹽水注射前、注射期及停止注射后心電、腦電均無(wú)明顯改變。

3.2 實(shí)驗(yàn)組

嗎啡給藥前、給藥期、停藥后HR的平均值見表1。給藥期HR較給藥前顯著減慢，P

實(shí)驗(yàn)組腦電分析的結(jié)果見表2。嗎啡依賴大鼠給藥期α波較給藥前增加，P

4 討論

據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，高濃度嗎啡(15～120μmol/L)可使心肌細(xì)胞APD 和 ERP 延長(zhǎng)，且呈劑量依賴性［2］。本實(shí)驗(yàn)在給藥過(guò)程中HR減慢但與嗎啡劑量不呈比例，這可能與嗎啡抑制血管運(yùn)動(dòng)中樞，釋放組胺、CO2蓄積導(dǎo)致血管擴(kuò)張，引起血壓降低，通過(guò)降壓反射使得心率增加有關(guān)［3］。停藥戒斷后，心率加快，與交感緊張度升高有關(guān)，也可能與體內(nèi)嗎啡的濃度逐漸降低有關(guān)。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，嗎啡依賴大鼠在發(fā)生戒斷后，δ波顯著增高，這可能與阿片類物質(zhì)立即停藥后導(dǎo)致中腦邊緣多巴胺系統(tǒng)的VTA神經(jīng)元自發(fā)放電活動(dòng)增強(qiáng)有關(guān)。而這種自發(fā)放電活動(dòng)的增強(qiáng)，與行為敏感的形成以及戒斷的厭惡動(dòng)機(jī)癥狀有關(guān)［4］。另外發(fā)生戒斷反應(yīng)時(shí)，軀體處于一種生理應(yīng)激狀態(tài)［5］也可能是嗎啡依賴者δ波增多的原因。戒斷后α波減少，可能與嗎啡的濫用導(dǎo)致腦血流減少，影響腦血流量的自動(dòng)調(diào)節(jié)［6］ ，而已有的腦電生理研究顯示，腦血流量是與α波呈正相關(guān)而與δ呈負(fù)相關(guān)［7］。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果也顯示，大鼠戒斷后δ波顯著增高，α波顯著減少。

參考文獻(xiàn)

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篇7

[關(guān)鍵詞] 烏頭堿；糞樣；代謝組學(xué)；核磁共振

[中圖分類號(hào)] R917 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1673-7210（2013）05（b）-0018-04

附子（Radix Aconiti Lateralis Preparata）為毛茛科植物烏頭（Aconitum Carmichalii Debx.）的子根，其在我國(guó)傳統(tǒng)中藥中被譽(yù)為“回陽(yáng)救逆第一品藥”。其藥理作用主要包括鎮(zhèn)痛、消炎[1-5]、強(qiáng)心、抗心律失常、抗腫瘤、增強(qiáng)免疫力等[6]。但是由于附子治療窗狹窄，往往在發(fā)揮治療作用的同時(shí)伴隨有嚴(yán)重的毒副反應(yīng)，這些常會(huì)造成臨床上的誤用濫用現(xiàn)象。以烏頭堿為代表的雙酯二萜型烏頭類生物堿是附子毒性的主要來(lái)源，其毒副作用主要表現(xiàn)為心臟毒性[7-11]與神經(jīng)毒性[12-13]。

代謝組學(xué)是從整體角度研究生物體系受外部刺激而引起的代謝產(chǎn)物的變化規(guī)律，現(xiàn)在已經(jīng)廣泛應(yīng)用于研究藥物毒性[14-17]、新藥安全性評(píng)價(jià)[18-19]、疾病診斷[20-22]等領(lǐng)域。糞便代謝物譜也是研究機(jī)體應(yīng)激反應(yīng)的重要方面，其能客觀全面的反映腸道菌群對(duì)于食物、疾病及藥物代謝的作用[23-25]，為藥物研究及疾病診斷提供輔的生物學(xué)信息。我們已經(jīng)對(duì)附子、烏頭類生物堿對(duì)大鼠血漿、尿液的代謝物譜的毒性作用進(jìn)行了系統(tǒng)的研究[14-16]。本文主要利用核磁共振（NMR）的代謝組學(xué)方法檢測(cè)大鼠糞樣代謝物譜，考察烏頭堿急性毒性作用時(shí)對(duì)大鼠腸道菌群的影響，通過(guò)多元統(tǒng)計(jì)的模式識(shí)別及相關(guān)性分析，尋找造成機(jī)體代謝紊亂的相關(guān)潛在差異代謝物，最終對(duì)相關(guān)代謝通路進(jìn)行深入研究。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組

健康雄性Wistar大鼠15只，體重（201.3±5.4）g，清潔級(jí)，軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)：SCXK-（軍）2007-004，在動(dòng)物房代謝籠中12 h晝夜交替適應(yīng)性飼養(yǎng)1周，動(dòng)物自由攝食飲水，溫度20～23℃，濕度60%左右。隨機(jī)分為給藥組、對(duì)照組，給藥組10只，對(duì)照組5只。

1.2 試劑與儀器

烏頭堿（Aconitine，中國(guó)藥品生物制品檢定所）；重水（D2O，美國(guó)Norell公司）；2，2，3，3，三甲基甲硅烷基丙酸（TSP，加拿大默克公司）；戊巴比妥鈉（國(guó)藥化學(xué)試劑有限公司）；NaH2PO4?2H2O，Na2HPO4?12H2O（國(guó)藥化學(xué)試劑有限公司）。VarianUNITY INOVA 600 MHz超導(dǎo)脈沖傅立葉變換核磁共振譜儀（美國(guó)瓦里安公司）；Eppendorf 5024離心機(jī)（德國(guó)Eppendorf公司）；QL-901渦旋振蕩器（海門市其林貝爾儀器制造有限公司）。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 實(shí)驗(yàn)用藥品的制備 精密稱量8.80 mg烏頭堿標(biāo)準(zhǔn)品，添加44 mL去離子水和30 μL 36%～38%的濃鹽酸，渦旋振蕩，得到濃度為0.2 mg/mL的烏頭堿溶液，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.2 生物樣品的采集 動(dòng)物適應(yīng)性結(jié)束后，給藥組按照2.54 mg/kg的劑量灌胃給予烏頭堿，對(duì)照組灌胃給予同劑量的飲用水，收集給藥6 h后的大鼠糞樣。然后腹腔注射戊巴比妥鈉（3%，1.5 mL/kg）麻醉大鼠，分離心臟、肝臟及腎臟，用生理鹽水沖洗，濾紙吸干，稱重，并計(jì)算臟器系數(shù)。最后將生物樣品保存在-20℃冰箱中，待用。

1.4 核磁共振數(shù)據(jù)的采集與預(yù)處理

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 大鼠行為學(xué)觀察、體重及臟器系數(shù)的變化

2.3 多元統(tǒng)計(jì)分析

3 討論

在實(shí)驗(yàn)中，由大鼠的行為學(xué)、臟器系數(shù)及體重分析可知，烏頭堿的攝入直接影響了大鼠心臟、肝臟、腎臟及神經(jīng)系統(tǒng)的的正常生理功能，進(jìn)而導(dǎo)致代謝通路及代謝物含量的紊亂，表明烏頭堿對(duì)于機(jī)體具備極強(qiáng)的毒性，這也和之前關(guān)于烏頭堿毒性的報(bào)道吻合[14-16]。

本實(shí)驗(yàn)采用的基于核磁共振的代謝組學(xué)方法研究了烏頭堿對(duì)于大鼠糞樣中代謝物的影響，客觀全面地反映了機(jī)體受到應(yīng)激后的病理生理變化。由大鼠的糞樣1H-NMR譜分析可知，α-氨基戊酸、谷氨酸、苯丙氨酸的含量降低，顯示烏頭堿造成了機(jī)體氨基酸代謝的紊亂，在大部分哺乳動(dòng)物體內(nèi)，谷氨酸與精氨酸、谷氨酰胺、脯氨酸、天冬氨酸等能經(jīng)過(guò)器官間復(fù)雜的新陳代謝可以實(shí)現(xiàn)相互轉(zhuǎn)換，文中只出現(xiàn)谷氨酸的含量降低，可能是腸道新陳代謝中出現(xiàn)了相關(guān)酶及代謝通路的抑制[35]。谷氨酰氨與谷氨酸、γ-氨基丁酸之間的相互轉(zhuǎn)換在維持腦的興奮（谷氨酸為主）-抑制系統(tǒng)（γ-氨基丁酸為主）平衡方面發(fā)揮重要作用[36-37]，谷氨酸含量降低，表明谷氨酰胺向谷氨酸轉(zhuǎn)化的方向出現(xiàn)了障礙，這也與大鼠給藥后出現(xiàn)活動(dòng)量減少，反應(yīng)遲鈍等行為學(xué)表現(xiàn)相印證。谷氨酸對(duì)于哺乳動(dòng)物的生長(zhǎng)及維持腸道功能也至關(guān)重要，這點(diǎn)可能也與實(shí)驗(yàn)大鼠的食欲不振有一定的關(guān)系。

芳香族氨基酸的酵解通常由腸道中的厭氧菌來(lái)完成，其代謝產(chǎn)物為酚和吲哚類化合物，這兩類代謝物則分別是致癌輔助劑和結(jié)腸癌啟動(dòng)子[38]。實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)的苯丙氨酸在烏頭堿攝入后的含量急劇降低，可能是大鼠在病理狀態(tài)下厭氧菌的代謝增強(qiáng)，造成體內(nèi)毒性物質(zhì)蓄積，從而使腸道正常的生理功能被破壞。苯丙氨酸也是一些重要的小分子激素合成的前體，其含量的降低，可能會(huì)造成腎上腺素、去甲腎上腺素、多巴胺等激素的功能障礙，進(jìn)而影響機(jī)體正常的新陳代謝[39]。此外，氨基酸含量的降低，也可能是腸道菌群數(shù)量受到烏頭堿攝入的影響，菌群數(shù)量的減少造成了蛋白質(zhì)降解及氨基酸合成的降低，這在已有的一些報(bào)道中得到了證實(shí)[40-41]。

腸道菌群不僅參與食物的消化、吸收，而且在維持機(jī)體應(yīng)激狀態(tài)下的腸道功能正常方面也是至關(guān)重要的。因此，糞便代謝組學(xué)為本研究提供了有關(guān)宿主、飲食及共生的腸道微生物之間相互作用的生物學(xué)信息，為相關(guān)疾病的診斷提供了輔的工具。

本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果分析表明，烏頭堿的攝入不僅造成了大鼠心、肝、腎等臟器損傷，也導(dǎo)致了氨基酸、能量等代謝通路的紊亂，客觀全面地反映了烏頭堿對(duì)于糞便代謝物譜的影響。通過(guò)糞便代謝物譜的分析為相關(guān)學(xué)者認(rèn)識(shí)腸道微生物及其在人體代謝中的特殊作用打開了窗口，也為進(jìn)一步研究烏頭類生物堿及中藥毒性提供了新途徑、新思路。

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篇8

【關(guān)鍵詞】 螺旋藻；衰老；記憶障礙；改善作用

螺旋藻含有豐富的蛋白質(zhì)、游離氨基酸、糖、不飽和脂肪酸、多種維生素及微量元素，是一種具有重要經(jīng)濟(jì)價(jià)值的保健食品。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)螺旋藻能夠增強(qiáng)自身免疫，延緩衰老〔1〕。而有關(guān)螺旋藻對(duì)D半乳糖所致衰老小鼠學(xué)習(xí)記憶障礙有否改善作用，目前還未見報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)建立D半乳糖所致衰老小鼠模型，以學(xué)習(xí)記憶能力、腦組織中的單胺氧化酶（MAO）、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSHPx）活性為指標(biāo)，觀察螺旋藻對(duì)衰老小鼠學(xué)習(xí)記憶障礙有否改善作用，并探討其作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 試劑 螺旋藻干粉由廣州龍力貿(mào)易發(fā)展有限公司生產(chǎn)。D半乳糖由上海試劑二廠生產(chǎn)，用蒸餾水配置成30 g/L濃度的溶液待用。MAO和GSHPx試劑盒及蛋白定量測(cè)試盒由南京建成生物工程公司生產(chǎn)。

1.2 動(dòng)物與分組 昆明種健康清潔級(jí)雄性小鼠40只，體重28～34 g，由南京醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。隨機(jī)分為4組，每組10只，即模型組：每日按照300 mg/kg劑量頸部皮下注射D半乳糖，同時(shí)用等量的蒸餾水灌胃；低劑量組：按上述劑量頸部皮下注射D半乳糖，同時(shí)用1.5 g/kg劑量的螺旋藻灌胃；高劑量組：按上述劑量頸部皮下注射D半乳糖，同時(shí)用3 g/kg劑量的螺旋藻灌胃；對(duì)照組：按上述同樣劑量的蒸餾水分別頸部皮下注射和灌胃。各組動(dòng)物正常進(jìn)食，持續(xù)6 w后，對(duì)各組動(dòng)物進(jìn)行行為學(xué)測(cè)試以及腦組織生化測(cè)定。

1.3 避暗實(shí)驗(yàn) 實(shí)驗(yàn)裝置分明箱和暗箱兩部分，兩箱之間有一小洞供小鼠通過(guò)，箱底部設(shè)有銅柵可電擊動(dòng)物。實(shí)驗(yàn)時(shí)將小鼠背向洞口置于明箱，當(dāng)小鼠進(jìn)入暗箱時(shí)，用36 V電擊3 s，小鼠又會(huì)逃至明箱。記錄5 min內(nèi)的錯(cuò)誤次數(shù)即小鼠進(jìn)入暗箱的次數(shù)，以此作為學(xué)習(xí)成績(jī)。24 h后再測(cè)，以其錯(cuò)誤次數(shù)和潛伏期(即第一次進(jìn)入暗箱的時(shí)間)作為記憶成績(jī)。

1.4 Morris水迷宮實(shí)驗(yàn) Morris水迷宮由圓形水槽、有機(jī)玻璃平臺(tái)、攝像系統(tǒng)和電腦分析系統(tǒng)組成。訓(xùn)練時(shí)水溫保持在25℃左右，將小鼠面向池壁從4個(gè)不同象限入水，每只小鼠每日訓(xùn)練4次，小鼠從入水到找到平臺(tái)所需的時(shí)間稱為潛伏期。找到后在平臺(tái)上應(yīng)保持20 s，如果60 s還未找到，則應(yīng)將其引導(dǎo)到平臺(tái)上，潛伏期按60 s計(jì)。連續(xù)4 d進(jìn)行定向航行實(shí)驗(yàn)，記錄第4天每只小鼠潛伏期的平均值。第5天進(jìn)行空間探索實(shí)驗(yàn)，即在撤掉平臺(tái)時(shí)，記錄120 s內(nèi)小鼠穿越平臺(tái)的次數(shù)。

1.5 小鼠腦組織MAO和GSHPx活性的測(cè)定 行為測(cè)試完成后，將小鼠頸椎拉斷處死，迅速斷頭取腦、稱重。按照試劑盒說(shuō)明書，檢測(cè)腦組織MAO和GSHPx活性。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 數(shù)據(jù)用x±s表示，采用SPSS12.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。

2 結(jié)果

2.1 避暗實(shí)驗(yàn)結(jié)果 對(duì)照組與模型組相比，無(wú)論是學(xué)習(xí)成績(jī)，還是記憶成績(jī)，都表現(xiàn)出了差異性，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05或P＜0.01)；除了低劑量組記憶成績(jī)中的潛伏期與模型組相比沒(méi)有表現(xiàn)出明顯差異外，低劑量和高劑量的其余數(shù)據(jù)都差異明顯(P＜0.05)，學(xué)習(xí)和記憶成績(jī)都好于模型組。見表1。

表1 各組小鼠避暗實(shí)驗(yàn)成績(jī)（略）

與模型組比較:1)P＜0.05，2)P＜0.01；下表同

2.2 Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)成績(jī) 對(duì)照組的學(xué)習(xí)記憶成績(jī)都好于模型組，數(shù)據(jù)的差異性，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；除了低劑量組的穿越次數(shù)與模型組相比差異不明顯外，低劑量組和高劑量組的其余數(shù)據(jù)都差異明顯，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，學(xué)習(xí)記憶成績(jī)都好于模型組。見表2。

2.3 小鼠腦組織MAO和GSHPx活性的測(cè)定結(jié)果 模型組的MAO活性高于對(duì)照組（P＜0.01）；而低劑量組和高劑量組的MAO活性又低于模型組(P＜0.05)。模型組的GSHPx活性低于對(duì)照組(P＜0.05)；而高劑量組的GSHPx活性又高于模型組(P＜0.05)。見表2。

表2 各組小鼠水迷宮實(shí)驗(yàn)成績(jī)和腦組織MAO、GSHPx活性（略）

3 討論

D半乳糖在體內(nèi)利用過(guò)程中，可產(chǎn)生過(guò)量的自由基，誘發(fā)動(dòng)物的衰老，引起癡呆樣的行為及病理性改變，導(dǎo)致細(xì)胞腫脹、代謝紊亂、體內(nèi)活性氧水平升高、細(xì)胞膜脂質(zhì)受損，以至引起多器官系統(tǒng)功能的衰退〔2〕。本實(shí)驗(yàn)的行為檢測(cè)結(jié)果與之一致，即模型組小鼠的學(xué)習(xí)記憶出現(xiàn)了障礙，同時(shí)小鼠的狀態(tài)也明顯下降，表現(xiàn)為:毛色灰暗、稀疏，行動(dòng)緩慢，步態(tài)蹣跚，皮下脂肪減少。但是當(dāng)補(bǔ)充螺旋藻后，低劑量組和高劑量組的學(xué)習(xí)記憶能力又不同程度得到恢復(fù)，說(shuō)明螺旋藻可以改善由D半乳糖所導(dǎo)致的學(xué)習(xí)記憶障礙。

本研究表明，衰老模型組的MAO活性比對(duì)照組高，當(dāng)補(bǔ)充螺旋藻后，治療組的MAO活性又降低。MAO是動(dòng)物腦中單胺類遞質(zhì)的氧化分解酶，主要存在于細(xì)胞內(nèi)線粒體外膜上，作用的底物是去甲腎上腺素、多巴胺、腎上腺素等單胺類物質(zhì)。裘月等〔3〕的研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)機(jī)體衰老時(shí)，動(dòng)物腦內(nèi)的MAO活性升高，使遞質(zhì)高度氧化，造成單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的減少；與此同時(shí)，MAO在分解多巴胺的過(guò)程中，又可以產(chǎn)生 H2O2，H2O2與腦內(nèi)Fe2＋進(jìn)一步反應(yīng)則可產(chǎn)生自由基，從而導(dǎo)致神經(jīng)細(xì)胞的損傷，影響學(xué)習(xí)記憶功能。由此MAO被認(rèn)為是衰老的分子標(biāo)志之一，MAO活性可間接反映生物體的衰老程度，故又稱為“衰老相關(guān)酶”。模型組的MAO活性升高，說(shuō)明通過(guò)D半乳糖建模成功。當(dāng)補(bǔ)充螺旋藻后，其中的某種成分通過(guò)某種機(jī)制又使MAO活性降低。MAO活性被抑制，可導(dǎo)致內(nèi)源性單胺的蓄積，從而恢復(fù)記憶能力〔4〕。另外，衰老模型組的GSHPx活性比對(duì)照組低，當(dāng)補(bǔ)充螺旋藻后，GSHPx 的活性又升高。GSHPx也是機(jī)體內(nèi)清除自由基的重要抗氧化酶之一，可抵抗氧自由基損傷，維持組織、細(xì)胞和蛋白質(zhì)的正常結(jié)構(gòu)與功能。在維持機(jī)體氧化還原平衡等方面發(fā)揮重要作用，是抗衰老的重要指標(biāo)〔5〕。

螺旋藻營(yíng)養(yǎng)豐富，含有18種氨基酸、12種礦物質(zhì)、8種維生素和多種生物活性物質(zhì)，其中的某些物質(zhì)可能通過(guò)多種代謝途徑，直接或間接影響著與衰老有關(guān)的物質(zhì)〔6～8〕。螺旋藻通過(guò)種種途徑增強(qiáng)了機(jī)體的抗氧化酶活性，減弱了脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)，有效清除了過(guò)量的自由基，使腦組織功能有所恢復(fù)，進(jìn)而表現(xiàn)出了對(duì)衰老小鼠學(xué)習(xí)記憶障礙的改善作用。有關(guān)螺旋藻改善衰老小鼠學(xué)習(xí)記憶障礙的機(jī)制頗為復(fù)雜，究竟哪些物質(zhì)在發(fā)揮作用，經(jīng)過(guò)了怎樣的途徑，這些問(wèn)題還都不明了，仍然有待于今后的工作。

參考文獻(xiàn)

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篇9

腦得生總苷是以中國(guó)藥典2005年版收載的腦得生片（由三七、葛根、川芎、紅花、山楂等中藥組成，具有活血化瘀，疏通經(jīng)絡(luò)，醒腦開竅功能。用于治療瘀血阻絡(luò)所致的眩暈、中風(fēng)等）處方為依據(jù)，經(jīng)大孔樹脂吸附純化提取，分離出來(lái)的治療腦血管疾病的有效部位群，主要含有三七總皂苷、葛根總黃酮等。本實(shí)驗(yàn)就腦得生總苷對(duì)全腦缺血再灌注損傷和局灶性永久性腦缺血的預(yù)防和治療作用進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)性研究，為開展臨床試驗(yàn)提供參考。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1．1 藥品：腦得生總苷，由浙江省中醫(yī)藥研究院提供，批號(hào)：051201(4g生藥／0．2g)；腦得生片，由江西三越藥業(yè)有限責(zé)任公司提供，批號(hào)：20050301(0．665g生藥／0．3g／片)。其它試劑，水合三氯乙醛(批號(hào)：20030227），紅四氮唑(TTC，批號(hào)：F20050620），均為中國(guó)醫(yī)藥集團(tuán)上海化學(xué)試劑公司產(chǎn)品；尼莫地平，由鄭州瑞康制藥廠提供（批號(hào)：20040106）。

1．2 動(dòng)物：Wistar大鼠，清潔級(jí)，雄性，體重200~350g，由浙江省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物質(zhì)量合格證號(hào)為浙實(shí)動(dòng)單項(xiàng)準(zhǔn)第2001001號(hào)。動(dòng)物飼養(yǎng)于正壓凈化通風(fēng)動(dòng)物房?jī)?nèi)，溫度25±2℃，濕度50％～70％，人工照明模擬晝夜變化，自由進(jìn)食與飲水。

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2．1 腦得生總苷抗全腦缺血再灌損傷的實(shí)驗(yàn)研究：取健康雄性Wistar大鼠，體重200~350g，共50只，隨機(jī)分成5組，即陰性對(duì)照組(0．5％西黃芪膠，5ml／kg體重）、腦得生總苷低劑量組(1g生藥／kg體重)、中劑量組(2g生藥/kg體重)、高劑量組(4g生藥／kg體重)及陽(yáng)性對(duì)照組(腦得生片2g生藥／kg體重)。于缺血前一小時(shí)灌胃給藥，體積為5ml／kg體重。

將動(dòng)物用12％的水合三氯乙醛腹腔麻醉(360mg／kg體重），在枕后暴露第一頸椎橫突孔，用雙極電凝對(duì)準(zhǔn)橫突孔電灼凝固雙側(cè)椎動(dòng)脈。然后在頸部作一切口暴露雙側(cè)頸動(dòng)脈，分離后，用1號(hào)絲線穿好，縫合傷口。于術(shù)后24小時(shí)，大鼠清醒時(shí)，用帶硅膠管的動(dòng)脈夾將雙側(cè)頸動(dòng)脈夾閉，即造成4根動(dòng)脈閉塞全腦缺血，取出動(dòng)脈夾可使血流再通，為再灌流期。實(shí)驗(yàn)缺血與再灌時(shí)間均為1小時(shí)。凡缺血1小時(shí)內(nèi)腦電圖未消失的動(dòng)物一律剔除。觀察指標(biāo)為缺血后腦電圖消失時(shí)間，再灌后腦電圖恢復(fù)時(shí)間及翻正反射恢復(fù)時(shí)間。再灌實(shí)驗(yàn)完畢，立即斷頭取腦，于電子天平上稱濕重，將大腦置于60℃烘箱內(nèi)烘干至恒重(從烘干第3日起每天稱量并記錄一次，直至連續(xù)兩次重量之差小于1％)，求出各組的腦含水量。

腦含水量=腦濕重-腦干重腦濕重×100％

所有的數(shù)據(jù)均用x±s表示，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析用t檢驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1、表2。

2．2 腦得生總苷對(duì)大鼠電凝引起局灶性永久性腦缺血損傷的實(shí)驗(yàn)研究：取健康雄性Wistar大鼠，體重200~250g，共60只，隨機(jī)分成6組，陰性對(duì)照組(生理鹽水，5ml／kg體重)、腦得生總苷低劑量組(1g生藥／kg體重)、中劑量組(2g生藥／kg體重)、高劑量組(4g生藥／kg體重)及2個(gè)陽(yáng)性對(duì)照組(腦得生片2g生藥／kg體重、尼莫地平5 mg／kg體重)。于手術(shù)后立即灌胃給藥，體積為5ml／kg體重。

將動(dòng)物用12％的水合三氯乙醛腹腔麻醉(350mg／kg體重)，側(cè)臥位固定于手術(shù)臺(tái)上，沿右外耳道與右眼外眥連線的中點(diǎn)垂直于連線切開皮膚約2cm，然后在手術(shù)顯微鏡下沿顳肌中線依次切斷顳肌和咬肌，將這些肌肉向兩側(cè)分開，暴露顴骨弓。操作時(shí)注意保護(hù)面神經(jīng)和腮腺。用咬骨鉗除去顴弓，并沿顱骨剪開筋膜，從而暴露出顳前窩。用小牽張器將顴弓和下頜骨之間的距離撐大，暴露鱗狀骨的大部分，

然后在顴骨和鱗狀骨前聯(lián)合的前下方約2mm處鉆孔，開一約2mm直徑的小顱窗。此時(shí)透過(guò)硬腦膜就可見一條較直且少分支的小血管，即為大腦中動(dòng)脈(MCA)。它幾乎垂直路過(guò)嗅束向上而行。在顯微鏡下用細(xì)針刺破硬腦膜，分離血管周圍的軟腦膜和蛛網(wǎng)膜組織，使之游離。然后用細(xì)分針在嗅束與大腦中動(dòng)脈交界處輕挑起大腦中動(dòng)脈，電凝燒灼嗅束內(nèi)1mm至大腦下靜脈之間的大腦中動(dòng)脈。電凝時(shí)，為避免電凝不完全所致的出血，盡量將大腦中動(dòng)脈挑起，使血管內(nèi)血量減少。另外，為保護(hù)周圍組織免受燒傷，用濕棉球保護(hù)。阻斷大腦中動(dòng)脈后，用小塊肌肉組織輕敷于顱窗上，達(dá)到止血作用，術(shù)后回籠飼養(yǎng)。以上過(guò)程均在室溫恒定情況下進(jìn)行，以利于評(píng)價(jià)腦缺血程度。并于術(shù)后清醒時(shí)及24小時(shí)進(jìn)行行為學(xué)評(píng)分，評(píng)分采用單盲法，評(píng)分方法為：①提鼠尾離開地面約1尺，觀察前肢情況。正常大鼠兩前肢對(duì)稱地伸向地面，如果有左肩內(nèi)旋，左前肢內(nèi)收現(xiàn)象發(fā)生者，評(píng)分為4分，否則為0分；②將動(dòng)物置平滑地板上分別推左(或右)肩向?qū)?cè)移動(dòng)，檢查抵抗推動(dòng)的阻力,正常大鼠雙側(cè)阻力明顯且對(duì)稱,如果推右肩向左側(cè)移動(dòng)時(shí)，發(fā)現(xiàn)阻力下降者，根據(jù)下降程度的不同，評(píng)分為1～3分;③將動(dòng)物兩前肢置一金屬網(wǎng)上，觀察兩前肢的肌張力。正常大鼠兩前肢張力明顯且對(duì)稱。而發(fā)生左前肢張力下降者，根據(jù)下降程度的輕重評(píng)為0~3分。根據(jù)以上標(biāo)準(zhǔn)打分，滿分10分。評(píng)分后，斷頭取腦，將大腦平均冠狀分為5片，放于TTC溶液中，37℃溫育10～15分鐘，染色，梗死區(qū)不著色，正常腦組織染成紅色。用生理鹽水沖洗后數(shù)碼照相，圖像輸入電腦。然后分別稱量全腦重量和壞死區(qū)腦組織重量，計(jì)算壞死區(qū)部分占全腦重量的百分比，所有的數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析用t檢驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表3。

3 結(jié)論

篇10

Suppressive effect of intrathecal administration of diazepam on visceral pain induced by rectal instillation of formalin in rats

【Abstract】 AIM:　 To explore whether diazepam has a suppressive effect on visceral pain at the spinal level. METHODS: By intrathecal drug administration， the effect of diazepam on persistent visceral pain induced by rectal instillation of formalin was studied. RESULTS: Rectal instillation of formalin induced obvious visceral pain responses， which occurred mainly within 0~75 min after the rectal administration of formalin. Intrathecal pretreatment with three doses of diazepam suppressed the visceral pain responses induced by formalin and the analgesic action of diazepam was mainly within 0~60 min after the rectal administration of formalin. CONCLUSION: Intrathecal pretreatment with diazepam suppresses the visceral pain induced by rectal instillation of formalin， which suggests that diazepam exerts some suppressive effect on visceral pain at the spinal level.

【Keywords】 diazepam; visceral pain; formaldehyde; latency

【摘要】 目的： 研究地西泮在脊髓水平對(duì)內(nèi)臟痛有無(wú)抑制作用. 方法： 采用鞘內(nèi)給藥的方法觀察地西泮對(duì)大鼠直腸注入甲醛致持續(xù)性內(nèi)臟痛的抑制作用. 結(jié)果： ① 直腸注入甲醛可引起大鼠劇烈的內(nèi)臟痛反應(yīng)，疼痛反應(yīng)主要集中在甲醛刺激大鼠直腸后的75 min內(nèi). ② 鞘內(nèi)預(yù)先注入三個(gè)劑量的地西泮均可抑制甲醛刺激大鼠直腸誘發(fā)的內(nèi)臟痛，鎮(zhèn)痛作用主要集中在甲醛刺激直腸后的0~60 min. 結(jié)論： 鞘內(nèi)注射地西泮可抑制大鼠直腸注入甲醛引起的內(nèi)臟痛覺(jué)，提示地西泮在脊髓水平對(duì)內(nèi)臟痛有抑制作用.

【關(guān)鍵詞】　地西泮；內(nèi)臟痛覺(jué)；甲醛；潛伏期

0引言

地西泮（diazepam， valium， 安定）是苯二氮革類的典型代表藥物，也是臨床上最常用的鎮(zhèn)靜、催眠及抗焦慮藥.以往研究表明，鞘內(nèi)注入地西泮可抑制軀體痛覺(jué)的傳入［1］. 但其是否可以作用于脊髓從而抑制內(nèi)臟痛覺(jué)的傳入尚無(wú)定論.故本實(shí)驗(yàn)利用甲醛內(nèi)臟痛模型，應(yīng)用鞘內(nèi)注射地西泮至腰骶膨大的方法探索地西泮在脊髓水平對(duì)內(nèi)臟痛是否有抑制作用.

1材料和方法

1.1材料

雄性Sprague Dawley (SD)大鼠48只，體質(zhì)量180~220 g（第四軍醫(yī)大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供），實(shí)驗(yàn)前3 d將大鼠置于20~24℃，濕度為50%~60%的環(huán)境，保持晝夜節(jié)律. 實(shí)驗(yàn)時(shí)，將大鼠隨機(jī)分為6組（每組8只）： 直腸對(duì)照組： 直腸注入0.5 mL生理鹽水；模型組： 直腸注入0.5 mL 20 g/L甲醛；鞘內(nèi)對(duì)照組： 鞘內(nèi)注入10 μL生理鹽水，10 min后直腸注入0.5 mL 20 g/L甲醛；低劑量實(shí)驗(yàn)組：鞘內(nèi)注入10 μL濃度為0.4 g/L的地西泮，10 min后直腸注入0.5 mL 20 g/L甲醛；中劑量實(shí)驗(yàn)組： 鞘內(nèi)注入地西泮的濃度為1.6 g/L，其余同低劑量實(shí)驗(yàn)組；高劑量實(shí)驗(yàn)組：鞘內(nèi)注入地西泮濃度為3.0 g/L，其余同低劑量實(shí)驗(yàn)組. 地西泮（針劑）購(gòu)于西安利君制藥股份有限公司.實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，保持溫度（20~24℃）、濕度（50%~60%）和周圍環(huán)境安靜，避免不必要刺激的影響.本實(shí)驗(yàn)操作嚴(yán)格遵守國(guó)際疼痛學(xué)會(huì)(IASP)制定的《關(guān)于使用清醒動(dòng)物進(jìn)行疼痛研究的綱要》.

1.2方法

1.2.1鞘內(nèi)置管術(shù)經(jīng)腹腔注射戊巴比妥鈉（40 mg/kg）深度麻醉大鼠后，從C7水平沿背正中線向尾部切開皮膚、皮下組織、肌肉，暴露并去除T4椎板（約1 mm×1 mm），切開硬脊膜，經(jīng)鞘內(nèi)向尾部置入內(nèi)腔充盈7 μL生理鹽水的聚乙烯PE8導(dǎo)管（內(nèi)徑0.28 mm，外徑0.6 mm，購(gòu)自日本Natume公司），根據(jù)動(dòng)物大小確定置入導(dǎo)管從入口到腰骶膨大處的長(zhǎng)度（大約3～5 cm），經(jīng)導(dǎo)管注入生理鹽水后見硬膜破口處有腦脊液流出證明導(dǎo)管在蛛網(wǎng)膜腔內(nèi). 封外口，局部青霉素抗感染.術(shù)后單籠飼養(yǎng)3～5 d，觀察動(dòng)物狀態(tài)良好，無(wú)活動(dòng)障礙，則可進(jìn)行實(shí)驗(yàn)［2］.

1.2.2鞘內(nèi)給藥鞘內(nèi)置管術(shù)未引起大鼠運(yùn)動(dòng)障礙和毒性反應(yīng). 鞘內(nèi)對(duì)照組和三個(gè)實(shí)驗(yàn)組的大鼠在實(shí)驗(yàn)玻璃箱適應(yīng)30 min后，乙醚麻醉，用10 μL微量注射器（寧波鎮(zhèn)海玻璃儀器廠）將10 μL生理鹽水或不同濃度地西泮以0.5 μL/s的速度注入預(yù)先置好的聚乙烯PE8導(dǎo)管，后用7 μL生理鹽水洗脫，確保地西泮注入到脊髓，封外口. 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)完畢后，解剖證實(shí)導(dǎo)管內(nèi)口開口于蛛網(wǎng)膜下腔腰骶膨大處. 局部脊髓無(wú)損傷及陳舊性出血，說(shuō)明本實(shí)驗(yàn)結(jié)果可靠.

1.2.3內(nèi)臟疼痛的行為學(xué)觀察將30 cm×30 cm×30 cm的透明有機(jī)玻璃箱置于高于實(shí)驗(yàn)臺(tái)45 cm的玻璃臺(tái)上，實(shí)驗(yàn)前30 min將大鼠置于其中使其適應(yīng)環(huán)境，后用乙醚將其麻醉，在周圍裸露皮膚涂抹凡士林（避免甲醛接觸肛周皮膚引起軀體痛覺(jué)），將直徑1.5 mm的圓頭細(xì)管迅速經(jīng)插入直腸（鞘內(nèi)對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組鞘內(nèi)生理鹽水或地西泮處理10 min后進(jìn)行此操作），按分組要求分別將0.5 mL生理鹽水或0.5 mL 20 g/L甲醛溶液注入大鼠直腸. 以5 min為間隔，觀察并記錄90 min內(nèi)大鼠的內(nèi)臟痛相關(guān)行為（viseral pain related behaviors， VPRB）的數(shù)目［3］［A： 大鼠舔或輕咬腹部、下肢及會(huì)陰周圍的皮膚；B： 伸展軀體使其拉長(zhǎng)；C： 腹部收縮側(cè)屈身體；D： 全身收縮使背部拱起呈弓形，持續(xù)時(shí)間 (t)

統(tǒng)計(jì)學(xué)處理： 用SPSS 11.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理. 數(shù)據(jù)以x±s表示，用重復(fù)測(cè)量數(shù)據(jù)的方差分析對(duì)不同組的內(nèi)臟疼痛反應(yīng)做統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，用Dunnettt法分析第一個(gè)內(nèi)臟痛相關(guān)行為的潛伏期. P＜0.05為差異有顯著性.

2結(jié)果

2.1直腸注入甲醛后誘導(dǎo)的疼痛反應(yīng)以15 min為間隔，統(tǒng)計(jì)大鼠直腸注入不同溶液后90 min內(nèi)的行為學(xué)指標(biāo)(見表1). 大鼠直腸注入甲醛，可引起了大鼠劇烈的內(nèi)臟痛覺(jué)，疼痛反應(yīng)主要集中在甲醛刺激直腸后的75 min內(nèi)，其中，在甲醛刺激直腸后15~30 min，疼痛反應(yīng)最劇烈.

2.2鞘內(nèi)給予地西泮抑制大鼠內(nèi)臟痛覺(jué)反應(yīng)鞘內(nèi)注射生理鹽水對(duì)內(nèi)臟痛覺(jué)影響較小(表1). 3個(gè)實(shí)驗(yàn)組與模型組比較，內(nèi)臟疼痛反應(yīng)均明顯減弱(P

2.3各組大鼠出現(xiàn)第一個(gè)VPRB的潛伏期直腸對(duì)照組、模型組、鞘內(nèi)對(duì)照組、低劑量實(shí)驗(yàn)組、中劑量實(shí)驗(yàn)組、高劑量實(shí)驗(yàn)組第一個(gè)VPRB的潛伏期分別為(79.2±11.8) s; (22.5±1.4 ) s; (24.1±1.7) s; (47.3±5.3) s; (42.3±3.5) s; (69.2±7.2 ) s. 模型組第一個(gè)VPRB的潛伏期較直腸對(duì)照組明顯縮短（P

3討論

內(nèi)臟痛（visceral pain）是一種臨床上常見的疼痛現(xiàn)象.目前研究?jī)?nèi)臟痛的模型較多，但在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中易混雜軀體痛覺(jué)的影響. 在本研究中，我們直接將0.5 mL濃度為20 g/L的甲醛溶液通過(guò)圓頭塑料管注入大鼠直腸，觀察并計(jì)數(shù)內(nèi)臟痛相關(guān)行為發(fā)現(xiàn)，直接將甲醛注入直腸后大鼠的內(nèi)臟痛行為反應(yīng)較直腸對(duì)照組強(qiáng)烈，并且大鼠出現(xiàn)第一個(gè)VPRB的潛伏期較直腸對(duì)照組也明顯縮短，表明直接將甲醛注入大鼠直腸可誘發(fā)大鼠的內(nèi)臟痛覺(jué)，并且甲醛誘發(fā)的內(nèi)臟痛覺(jué)呈單相，主要集中在甲醛刺激直腸后的75 min內(nèi)，這不同于將甲醛注入直腸壁致內(nèi)臟痛所呈現(xiàn)的雙相時(shí)程［3］. 另外，本研究在直腸注入甲醛之前，將凡士林涂抹在大鼠的周圍，避免了軀體痛覺(jué)的影響，因此，本研究中甲醛刺激大鼠直腸引起的內(nèi)臟痛有特異性.

另外，將三種不同劑量的地西泮注入大鼠的蛛網(wǎng)膜下腔，發(fā)現(xiàn)鞘內(nèi)注入地西泮對(duì)大鼠的內(nèi)臟痛覺(jué)有抑制作用，主要表現(xiàn)在兩個(gè)方面： ① 直腸注入甲醛后的75 min內(nèi)，實(shí)驗(yàn)組大鼠的內(nèi)臟痛反應(yīng)較模型組明顯減弱；② 鞘內(nèi)注入地西泮后，大鼠出現(xiàn)第一個(gè)VPRB的潛伏期較模型組明顯延長(zhǎng). 另外，地西泮對(duì)內(nèi)臟痛抑制作用的持續(xù)時(shí)間與地西泮劑量成依賴關(guān)系，即鞘內(nèi)注入的地西泮劑量越大，其對(duì)內(nèi)臟痛的抑制時(shí)間越長(zhǎng).

鞘內(nèi)地西泮對(duì)內(nèi)臟痛的抑制作用可能與中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的GABA有關(guān).以往的很多證據(jù)表明，GABA及其受體在疼痛的調(diào)節(jié)過(guò)程中發(fā)揮重要的作用［4］. 另外，骶髓后連合核（sacral dorsal commissualnucleus， SDCN）是位于腰骶膨大處的重要核團(tuán)［5］，是盆腔內(nèi)臟傷害性信息感覺(jué)傳遞的中繼站［6］，其內(nèi)分布大量的GABA免疫陽(yáng)性的神經(jīng)元、終末以及GABAA受體［5，7-8］. 地西泮作為GABAA受體的配體之一，可作用于GABAA受體，促進(jìn)GABA與GABAA受體的結(jié)合，通過(guò)增強(qiáng)Cl-通道開放的頻率增強(qiáng)GABA對(duì)GABAA受體的作用而顯示中樞抑制作用. 在本實(shí)驗(yàn)中，鞘內(nèi)注射地西泮至腰骶膨大，地西泮可能作用于SDCN上的GABAA受體，促進(jìn)GABA與GABAA受體的結(jié)合能力，增強(qiáng)了GABAA受體上Cl-通道開放的頻率，進(jìn)一步抑制了內(nèi)臟痛覺(jué)傳入神經(jīng)元間的突觸活動(dòng)，使內(nèi)臟痛覺(jué)傳入過(guò)程受阻，因此，鞘內(nèi)地西泮預(yù)處理10 min后將甲醛注入直腸，大鼠的內(nèi)臟疼痛反應(yīng)以及出現(xiàn)第一個(gè)VPRB的潛伏期較模型組分別減少和延長(zhǎng). 但至于地西泮是否真正可以增強(qiáng)GABA與SDCN上GABAA受體的結(jié)合，并無(wú)確切報(bào)道，有待于進(jìn)一步探究.

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